Thermo Fisher Scientific PrioCHECK FMDV NS serum cattle sheep goat pig Mode d'emploi

Marque: Thermo Fisher Scientific

Modèle: PrioCHECK FMDV NS serum cattle sheep goat pig

Taper: Mode d'emploi

Réservé à l’usage vétérinaire. Usage in vitro exclusivement.

NOTICE D’UTILISATION

PrioCHECK™ FMDV NS Ab Strip Kit

Test ELISA pour la détection

in vitro

des anticorps contre les protéines non structurales du Virus de la Fièvre aphteuse dans

le sérum du bétail, des moutons, des chèvres et des porcs

Référence Catalogue 7610770

Pub. Nº MAN0013929 Rév. A.0

AVERTISSEMENT !

Lire les fiches de données de sécurité (FDS) et suivre les consignes de manipulation. Porter des lunettes de sécurité, des

gants et des vêtements appropriés. Les fiches de données de sécurité (FDS) sont disponibles à l’adresse thermofisher.com/support.

AVERTISSEMENT ! RISQUES BIOLOGIQUES POTENTIELS.

Lire les informations de sécurité relatives aux risques biologiques du produit

disponibles sur thermofisher.com. Porter des lunettes de sécurité, des gants et des vêtements appropriés.

Introduction

La fièvre aphteuse constitue la menace économique la plus importante pour l'industrie animale. Cette maladie très contagieuse peut toucher une grande

partie des élevages et elle est très répandue dans le monde. Le virus de la fièvre aphteuse comporte 7 sérotypes distincts, ce qui rend assez complexe le

diagnostic avec les méthodes sérologiques classiques. Pour contrôler les épidémies qui pourraient se déclarer dans le futur, une vaccination d'urgence va

être mise en place. Le vaccin est (en partie) constitué de protéines structurales du virus de la fièvre aphteuse. Les animaux vaccinés ne produisent donc que

des anticorps dirigés contre les protéines structurales du virus. En revanche, l'infection naturelle par le virus de la fièvre aphteuse entraîne la synthèse

d'anticorps dirigés contre les protéines structurales mais aussi contre les protéines non structurales du virus. Ainsi, un ELISA détectant les anticorps dirigés

contre les protéines non structurales du virus de la fièvre aphteuse pourra dépister les animaux infectés par le virus, mais il permettra aussi de faire la

distinction entre les animaux infectés et les animaux vaccinés.

Applied Biosystems™ PrioCHECK™ FMDV NS Ab Strip Kit détecte les anticorps dirigés contre la protéine non structurale 3ABC du virus de la fièvre

aphteuse. Le test détecte les animaux infectés par le virus de la fièvre aphteuse, indépendamment du sérotype responsable de l'infection ou du statut

vaccinal de l'animal. Il peut être utilisé pour tester le bétail, les moutons, les chèvres et les porcs.

Principe du test

PrioCHECK™ FMDV NS Ab Strip Kit est un ELISA de type bloquant. Les plaques sensibilisées avec un anticorps monoclonal spécifique 3ABC sont incubées

avec la protéine 3ABC. L'antigène NS du virus va alors se lier à l'anticorps monoclonal fixé sur les plaques.

Les échantillons de sérum sont ensuite distribués sur la plaque. Après incubation, la plaque est lavée et le conjugué ajouté. Les anticorps dirigés contre les

protéines non structurales (NS) du virus de la fièvre aphteuse, s'ils sont présents dans l'échantillon, vont se lier à la protéine 3ABC et bloquer la liaison de

l'anticorps monoclonal marqué à la peroxydase. La plaque est incubée et lavée, le substrat chromogène (TMB) prêt à l'emploi est ensuite distribué et la

plaque est incubée à T° ambiante (22±3°C). A la fin de la période d'incubation, le développement de la coloration est stoppé et la densité optique (DO) est

mesurée à 450 nm afin de mettre en évidence la présence d'anticorps spécifiques de la fièvre aphteuse.

PrioCHECK™ FMDV NS Ab Strip Kit est réalisé en effectuant une seule dilution. La dilution du sérum varie en fonction du protocole choisi.

• Protocole d’incubation du sérum de nuit: Les sérums sont dilués au 1:5 avant d'être testés.

• Protocole d’incubation du sérum sur une journée: Les sérums sont dilués au 1:2.6 avant d'être testés.

Composition du coffret

Coffret de 5 plaques pour 450 échantillons (pour 30 séries d’analyses

indépendante maximum). PrioCHECK™ FMDV NS Ab Strip Kit, s'il n'est

pas utilisé immédiatement, peut être stocké à 5±3°C jusqu'à la date de

péremption, qui figure sur l'étiquette du coffret. La durée de conservation

des produits du coffret une fois dilués, ouverts ou reconstitués, est

mentionnée au chapitre s'y référant (voir ci-dessous).

Composant

Description

1 : Plaque de

microtitration

Cinq plaques de microtitration conditionnées sous vide

partiel dans des sachets contenant un déshydratant.

2 : Conjugué (30x)

Concentré 30x, à diluer avant utilisation. Un flacon

contenant 2.2 mL de conjugué.

Le conjugué dilué n’est pas stable, à préparer juste

avant utilisation.

3 : Tampon de dilution (2x)

Concentré 2x, à diluer avant utilisation.

Un flacon contenant 60 mL de tampon de dilution.

Conservation du tampon de dilution (1x) : 24 heures à

5±3°C.

4 : Additif

Lyophilisé. Reconstituer avant utilisation.

Cinq flacons contenant 2.5 mL d'additif lyophilisé.

Conservation de l’additif reconstitute : jusqu’à la date

de péremption à −20°C.

5 : Eau déminéralisée

Deux flacons contenant 10 mL d'eau déminéralisée.

6 : Liquide de lavage

(200x)

Concentré 200x, à diluer avant utilisation.

Un flacon contient 60 mL de liquide de lavage.

Conservation de la solution (1x) : 1 semaine à 22±3°C.

7 : Contrôle positif

Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 3.2 mL de

contrôle positif.

8 : Contrôle positif faible

Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 3.2 mL de

contrôle positif faible.

9 : Contrôle négatif

Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 3.2 mL de

contrôle négatif.

10 : Substrat chromogène

(TMB)

Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 60 mL de substrat

chromogène (TMB).

11 : Solution d'arrêt

Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 60 mL de solution

d'arrêt.

Autres composants du

coffret

• Notice d'utilisation

• 1 couvercle pour couvrir les barrettes pendant les

périodes d'incubation

•

1 sachet en aluminium

Equipement nécessaire mais non fourni

Sauf indication contraire, tous les produits sont disponibles sur

thermofisher.com.

Use

Description

Général

Equipement de laboratoire aux normes de sécurité nationales.

Analyse des

résultats

Lecteur de microplaques. Le lecteur doit être équipé d'un filtre

permettant de lire les plaques à 450 nm.

Optionnel

Laveur de microplaques.

Mode opératoire

Précautions

• Les Normes de Sécurité Nationales doivent être appliquées de façon

stricte.

• PrioCHECK™ FMDV NS Ab Strip Kit ne doit être réalisé que dans les

laboratoires équipés pour cela.

• Les échantillons doivent être considérés comme potentiellement

infectieux. Tout matériel en contact avec ces échantillons doit être

considéré comme potentiellement contaminé.

Remarques

Pour obtenir des résultats optimums avec PrioCHECK™ FMDV NS Ab Strip

Kit, les précautions suivantes doivent être prises :

• Le mode opératoire doit être rigoureusement suivi.

• Tous les réactifs du coffret doivent être ramenés à T° ambiante (22±3°C)

avant utilisation.

• L'embout des pipettes doit être changé à chaque fois qu'un nouvel

échantillon ou réactif est prélevé.

• Des réservoirs séparés doivent être utilisés pour chaque réactif.

• Les composants du coffret ne doivent pas être utilisés après la date de

péremption ou si un changement dans leur aspect est observé.

• Les réactifs provenant de coffrets portant des numéros de lots

différents, ne doivent pas être associés dans une même série de tests.

• Le test doit être réalisé avec de l'eau déminéralisée ou une eau

équivalente.

Solutions à préparer à l'avance

Tampon de dilution 1x

Diluer le tampon de dilution (Composant 3) concentré 1:2 dans l'eau

déminéralisée. Pour une plaque : préparer 4 mL (2.0 mL de tampon

concentré et 2.0 mL d'eau déminéralisée). Peut-être conserve à 5±3°C

pendant de 24 heures.

2 PrioCHECK™ FMDV NS Ab Strip Kit Notice d’Utilisation

Additif

Ramener le flacon d'additif (Composant 4) lyophilisé à 22±3°C et le

reconstituer avec 2.5 mL l'eau déminéralisée (Composant 5) fournie dans le

kit. Doit être conservé à −20°C jusqu’à la péremption.

Les réactifs lyophilisés doivent être reconstitués de la manière suivante :

1. Ramener les flacons à 22±3°C.

2. Tenir le flacon verticalement et le tapoter contre le plan de travail pour

s'assurer que tout le contenu du flacon se trouve au fond du flacon.

3. Ouvrir le flacon soigneusement.

4. Ajouter la quantité d'eau déminéralisée (Composant 5) spécifiée.

5. Reboucher le flacon et laisser le lyophilisat se dissoudre.

6. Agiter doucement le flacon jusqu'à dissolution complète du lyophilisat.

7. Laisser le flacon reposer au moins 15 minutes à 22±3°C avant utilisation.

8. Agiter de temps en temps le flacon par retournement (en évitant la

formation de mousse).

Tampon ELISA

Ajouter l'additif au tampon de dilution pour obtenir une concentration

finale de 10% (v/v). Pour deux barrettes : préparer 4 mL (0.4 mL d'additif et

3.6 mL de tampon de dilution). Conserver le tampon ELISA non utilisé

à 5±3°C pendant 24 heures.

Conjugué

Préparer la dilution de travail du conjugué (Composant 2) en diluant le

conjugué dans le tampon ELISA. Pour 2 barrettes : préparer 2.1 mL de

conjugué dilué. (ajouter 70 µL de conjugué (30x) à 2.03 mL de tampon

ELISA).

Note : Le conjugué dilué doit être préparé juste avant utilisation.

Solution de lavage

Diluer le liquide de lavage (concentré 200x) (Composant 6) dans l'eau

déminéralisée. La quantité de liquide de lavage fournie est suffisante pour

préparer un volume final de 12 litres.

Stabilité du liquide de lavage dilué : 1 semaine à 22±3°C.

Remarque : Les lavages peuvent être effectués avec un laveur automatique

ELISA. Si l'on ne dispose pas de laveur automatique, le lavage des plaques

peut être fait manuellement avec au minimum 200 µL de liquide de lavage

par puits. Puis vider la plaque et répéter le lavage autant de fois que spécifié.

Il n'est pas nécessaire d'égoutter les plaques sur du papier absorbant entre les

lavages. Tapoter fermement les plaques après le dernier cycle de lavage.

Incubation des sérums

Réaliser l’incubation du sérum en suivant le protocole de nuit ou le

protocole sur une journée. Les volumes requis des échantillons de test et de

contrôle diffèrent en fonction du protocole choisi.

Protocole d’incubation du sérum de nuit

1. Distribuer 80 µL de tampon ELISA dans tous les puits (Composant 1).

2. Déposer 20 µL de contrôle négatif (Composant 9) dans les puits A1 et B1.

3. Déposer 20 µL de contrôle positif faible (Composant 8) dans les puits

C1 et D1.

4. Déposer 20 µL de contrôle positif (Composant 7) dans les puits E1 et F1.

5. Déposer 20 µL d'échantillon dans les autres puits.

6. Couvrez la plaque de test avec le couvercle fourni.

7. Agiter doucement les plaques.

8. Incuber toute la nuit (16−18 heures) à 22±3°C.

Protocole d’incubation du sérum sur une journée

1. Distribuer 80 µL de tampon ELISA dans tous les puits (Composant 1).

2. Déposer 50 µL de contrôle négatif (Composant 9) dans les puits A1 et B1.

3. Déposer 50 µL de contrôle positif faible (Composant 8) dans les puits

C1 et D1.

4. Déposer 50 µL de contrôle positif (Composant 7) dans les puits E1 et F1.

5. Déposer 50 µL d'échantillon dans les autres puits.

6. Couvrez la plaque de test avec le couvercle fourni.

7. Agiter doucement les plaques.

8. Incuber 2 heures à 22±3°C.

Incubation avec le conjugue

Remarque : cette procédure doit se faire le deuxième jour en cas

d’utilisation du protocole d’incubation du sérum de nuit.

1. Vider la plaque de test après la période d’incubation du sérum, puis

laver la plaque 6 fois avec 200 à 300 µL de solution de lavage. Les

tapoter fermement sur du papier absorbant après le dernier cycle de

lavage.

2. Distribuer 100 µL de solution de travail du conjugué dans tous les puits.

3. Couvrez la plaque de test avec le couvercle fourni.

4. Incuber 60±5 minutes à 22±3°C.

Incubation avec le substrat chromogène (TMB)

1. Vider les plaques après incubation et laver 6 fois avec 200 à 300 µL la

solution de lavage. Les tapoter fermement sur du papier absorbant

après le dernier cycle de lavage.

2. Distribuer 100 µL de substrat chromogène (TMB) dans tous les puits.

3. Incuber 20 minutes à 22±3°C.

4. Distribuer 100 µL de solution d'arrêt (Composant 11) dans tous les puits.

5. Homogénéiser le contenu des plaques avant de mesurer la densité

optique (DO).

Remarque : Commencer à ajouter la solution d'arrêt 20 minutes après avoir

déposé la solution de substrat chromogène (TMB) dans le premier puits.

Distribuer la solution d'arrêt dans tous les puits en gardant le même ordre

et le même rythme que pour distribuer le substrat chromogène (TMB).

Lecture du test et calcul des résultats

1. Mesurer la densité optique (DO) des puits à 450 nm dans les 15 minutes

suivant l'addition de la solution d'arrêt.

2. Calculer la DO450 moyenne des puits A1 and B1 (contrôle négatif

= DO450 max).

3. Le pourcentage d'inhibition (PI) des sérums de contrôle et des

échantillons est calculé selon la formule ci-dessous.

La DO450 des échantillons est exprimée en pourcentage d'inhibition (PI) par

rapport à la DO450 max.

PI = 100 − (DO450 de l'échantillon / DO450 max) × 100

Interprétation des résultats

Validation des critères

1. La DO450 max (DO450 moyenne du contrôle négatif) doit être >1.000.

2. Le pourcentage d'inhibition du contrôle positif faible doit être >50%.

3. Le pourcentage d'inhibition du contrôle positif doit être >70%.

Si ces critères ne sont pas validés, les résultats de la série de tests sont

ininterprétables.

Remarque : Si la DO450 d'un échantillon est supérieure à la DO450 max, le

pourcentage d'inhibition peut être considéré comme étant égal à 0%. Si la

DO450 moyenne du contrôle négatif (DO450 max) est inférieure à 1.000, la

solution de substrat chromogène (TMB) était peut-être trop froide au

moment de son utilisation. Dans ce cas, penser à ramener la solution de

substrat à 22±3°C avant utilisation ou incuber les plaques plus longtemps

(sans dépasser 30 minutes d'incubation). Si la DO450 moyenne du contrôle

négatif (DO450 max) est supérieure à 2.000, il est conseillé de diminuer le

temps d'incubation avec le substrat chromogène (TMB).

Interprétation du pourcentage d'inhibition

PI = <50% Négatif

Absence d'anticorps spécifiques de la protéine NS du

virus de la fièvre aphteuse dans le prélèvement.

PI = ≥50% Positif

Présence d'anticorps spécifiques de la protéine NS du

virus de la fièvre aphteuse dans le prélèvement.

Références bibliographiques

Sørensen KJ, Madsen KG, Madsen ES, Salt JS, Nqindi J, Mackay DKJ (1998)

Differentiation of infection from vaccination in foot-and-mouth disease by

the detection of antibodies to the non-structural proteins 3D, 3AB and

3ABC in ELISA using antigens expressed in baculovirus. Arch Virol

143:1461–1476.

thermofisher.com/support | thermofisher.com/askaquestion

thermofisher.com

7 août 2019

Service clientèle et assistance technique

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nouveautés relatives aux services et à l'assistance technique, notamment :

• Numéros de téléphone partout dans le monde

• Commande et Support web

• Guides de l’utilisateur, manuels et protocoles

• Certificats d’analyse

• Fiches de Données de Sécurité (FDS, également appelées FS (Fiches

Signalétiques))

Remarque : Pour les FDS relatives aux réactifs et aux produits

chimiques d'autres fabricants, contacter chaque fabricant.

Garantie produit limitée

Life Technologies Corporation et ses filiales garantissent leurs produits

selon les termes et conditions générales de ventes disponibles sur le site

www.thermofisher.com/us/en/home/global/terms-and-conditions. Si vous

avez des questions, vous pouvez prendre contact avec Life Technologies à

l'adresse web suivante : thermofisher.com/support.

Prionics Lelystad B.V. | Platinastraat 33 | 8211 AR Lelystad | The Netherlands

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ET/OU SA OU SES FILIALE(S) NE SAURAIENT ÊTRE TENUES RESPONSABLES DE DOMMAGES

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DOCUMENT OU A SON USAGE OU EN RÉSULTANT.

Historique des révisions : Pub. N° MAN0013929 (français)

Rév.

Date

Description

A.0 7 août 2019

• Conversion effectuée du document existant (PrioCHECK FMDV-NS 5

strip 7610770_v1.0_f.doc) sur le modèle du document en cours, avec

mises à jour associées aux informations de licence limitée, à la

garantie, aux marques et aux logos.

• Ajout du protocole d’incubation du sérum sur une journée.

• Augmentation du volume de contrôles fournis avec le kit de 1.4 mL à

3.2 mL.

• Changement du nom du kit de PrioCHECK® FMDV NS en PrioCHECK™

FMDV NS Ab Strip Kit.

Informations importantes sur les licences : Ces produits peuvent être couverts par une ou plusieurs

licences à usage limité. En utilisant ces produits, vous acceptez les conditions générales de toutes

les licences à usage limité.

Thermo Fisher Scientific et de ses filiales, sauf indication contraire.

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