Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Bovine PI3 Ab Serum Kit Mode d'emploi

Marque
Thermo Fisher Scientific
Modèle
PrioCHECK Bovine PI3 Ab Serum Kit
Taper
Mode d'emploi
NOTICE D’UTILISATION
Réservé à l’usage vétérinaire. Usage in vitro exclusivement.
PrioCHECK™ Bovine PI3 Ab Serum Kit
Test immunoenzymatique de détection spécifique des anticorps anti-PI3 dans le
sérum de bovin
Référence Catalogue SPIV2
Partie Nº 100020218 Pub. Nº MAN0008365 Rév. A.0
Technique
Espèce
Matrice
Test
Protocole
ELISA indirect bicupule
– Plaques sécables
Bovin Sérum Individuel Incubation courte
AVERTISSEMENT !
Lire les fiches de données de sécurité (FDS) et suivre les consignes de
manipulation. Porter des lunettes de sécurité, des gants et des vêtements appropriés. Les fiches de
données de sécurité (FDS) sont disponibles à l’adresse thermofisher.com/support.
AVERTISSEMENT ! RISQUES BIOLOGIQUES POTENTIELS.
Lire les informations de sécurité relatives
aux risques biologiques du produit disponibles sur thermofisher.com. Porter des lunettes de
sécurité, des gants et des vêtements appropriés.
Informations générales
Le virus Parainfluenza de type 3 (virus PI3) est un paramyxovirus présent dans de nombreux cas
d'affections respiratoires ou digestives chez les bovins.
Généralement le virus PI3 est considéré comme un agent co-responsable de ces affections qui font
également intervenir des bactéries (Pasteurella hemolytica), et/ou des virus (BVD, IBR...). La transmission
du virus se fait essentiellement par l'intermédiaire des sécrétions nasales. Elle serait facilitée lors du
transport des animaux (contact direct, absence de ventilation, atmosphère confinée). Les symptômes
classiquement observés sont : hyperthermie, toux, jetage oculo-nasal, anorexie, dyspnée, diarrhée. Le
virus PI3 a également une activité immuno-suppressive, prédisposant les animaux à des infections
secondaires.
Il est fortement conseillé de diagnostiquer le virus PI3 par mise en évidence d'une séroconversion.
Principe du test
Le test est basé sur le principe d’un ELISA indirect bicupule.
1. Les échantillons et les contrôles sont déposés dans la plaque sensibilisée avec de l'antigène viral PI3
(AgV, colonnes impaires) et de l’antigène de contrôle (AgC, colonnes paires). Les anticorps, parmi
lesquels les anticorps spécifiques anti-PI3 éventuellement présents, se lient à l’AgV et seuls les
anticorps non-spécifiques se lient à l’AgC.
2. Après lavage, un conjugué anti-bovin marqué à la peroxydase est ajouté et se fixe sur les anticorps
préalablement fixés sur les microcupules.
3. Le conjugué non fixé est éliminé par lavage avant addition d’un substrat chromogène. L’apparition
d’une coloration bleue est la conséquence de l'oxydation du substrat par la peroxydase du conjugué.
4. Après arrêt de la réaction, la coloration devient jaune. La lecture des résultats est réalisée par un
lecteur de plaques ELISA.
L'apparition d'une coloration jaune indique la présence d’anticorps. Une réaction aspécifique se traduit
par une coloration équivalente entre les cupules AgV et AgC. Une réaction spécifique se traduit par
une coloration plus importante dans la cupule AgV par rapport à la cupule AgC. La différence entre ces
deux colorations indique le niveau de positivité de l’échantillon.
2 PrioCHECK™ Bovine PI3 Ab Serum Kit Notice d’Utilisation
Réactifs du kit et conservation
Composant Description
Quantité
(96 tests)
1 - Coated microplate PI3
Plaque sensibilisée PI3, 6 barrettes doubles de 16 cupules
2 unités
(1)
2 - Negative C. PI3
Contrôle négatif PI3 (NC)
500 µL
5±3°C
3 - Positive C. PI3
Contrôle positif PI3 (PC)
500 µL
4 - Conjugate (100x) PI3
Conjugué PI3, anti-bovin HRP 100 fois concentré
350 µL
(2)
A - Wash (10x)
Solution de lavage, 10 fois concentrée
125 mL
5±3°C
B - Dilution Buffer PI3
Diluant PI3.
Tampon de dilution pour les échantillons et le conjugué.
Le diluant peut présenter un léger trouble, qui ne modifie
pas les performances du kit.
50 mL
C - Substrate
Solution substrat
24 mL
D - Stop
Solution d’arrêt
24 mL
Adhésifs de plaques
4
(3)
(1) Les barrettes non utilisées peuvent être stockées dans le sachet fermé avec dessicant (fournis dans le kit) à 5±3°C jusqu’à la
date de péremption du kit.
(2) La solution de conjugué diluée est à utiliser immédiatement après préparation.
(3) Température ambiante
Matériel et réactifs requis pour l’analyse non fournis dans le kit
Sauf indication contraire, tous les produits sont disponibles sur thermofisher.com.
Micropipettes monocanales et multicanaux
Embouts de pipette à usage unique
Eau distillée ou déionisée
Incubateur de microplaque (37±2°C)
Réservoirs à usage unique
Lecteur ELISA équipé d’un filtre à 450 nm
ou de filtres à 450 et 620 nm
Précautions d’emploi
• Ne pas mélanger des réactifs provenant de différents lots de kits.
• Eviter la contamination des réactifs en utilisant du matériel de prélèvement à usage unique.
• Ne pas pipeter les réactifs avec la bouche.
Préparation des échantillons
Des sérums frais, réfrigérés (8 jours à 5±3°C) ou congelés (1 an < −16°C) sont utilisables. Les échantillons
et les contrôles préalablement homogénéisés sont testés dilués au 1:10.
NOTE : Il est fortement conseillé d’utiliser un traceur interne pour chaque manipulation. Une référence
interne (Réf. RPI3) est disponible.
Préparation des réactifs
• Les réactifs 1 - Coated microplate PI3, B - Dilution Buffer PI3, C - Substrate, et D - Stop sont prêts à
l’emploi.
• Les réactifs 2 - Negative C. PI3 et 3 - Positive C. PI3 sont à tester comme les échantillons.
• La solution de lavage A - Wash (10x) est à diluer au 1:10 dans de l'eau distillée/déionisée.
Exemple : pour une barrette : 2 mL de solution A - Wash (10x) dans 18 mL d'eau ; pour une plaque :
25 mL de solution A - Wash (10x) dans 225 mL d’eau.
Mélanger après dilution. La solution Wash diluée peut être conservée 1 mois à 5±3°C.
NOTE : Du fait d’une forte concentration en sels, des cristaux peuvent se former dans la solution
A - Wash (10x). Les cristaux peuvent être dissous sous agitation. Il est recommandé d’homogénéiser la
solution avant dilution.
• Le conjugué anti-bovin HRP 4 - Conjugate (100x) PI3 est à diluer au 1:100 dans la solution
B - Dilution Buffer PI3.
Mélanger après dilution. La solution Conjugate PI3 diluée est à utiliser immédiatement après
préparation.
PrioCHECK™ Bovine PI3 Ab Serum Kit Notice d’Utilisation 3
Réalisation du test ELISA
NOTE : Porter les réactifs à température ambiante (21±4°C) avant la réalisation du test. La zone de
tolérance des temps d’incubation est de ±10%. Il est recommandé d’utiliser des réservoirs à usage unique
pour la distribution des composants.
1. Distribution des contrôles et des échantillons
• Distribuer 10 µL du réactif 2 - Negative C. PI3 dans les cupules A1, A2 et B1, B2 (par exemple).
• Distribuer 10 µL du réactif 3 - Positive C. PI3 dans les cupules C1, C2 et D1, D2 (par exemple).
• Distribuer 10 µL de sérum à analyser par puits dans un couple de deux cupules (chaque échantillon
est déposé dans un puits AgV et dans le puits AgC adjacent).
• Distribuer 90 µL de réactif B - Dilution Buffer PI3 dans les cupules contenant les échantillons et les
contrôles.
Agiter doucement et couvrir la plaque à l’aide d’un adhésif de plaque. Incuber la plaque 1 heure à 37±2°C.
2. Lavages
Vider la plaque et réaliser 4 lavages avec la solution Wash diluée (voir « Préparation des réactif ») à
raison de 300 µL par cupule. Vider et tapoter la plaque sur un papier absorbant pour éliminer toute trace
de liquide. Les lavages sont réalisables, au choix, manuellement ou au laveur automatique. Ne pas laisser
sécher les plaques.
3. Conjugué
Distribuer 100 µL de solution Conjugate PI3 diluée (voir « Préparation des réactifs ») dans chaque cupule.
Agiter doucement et couvrir la plaque à l’aide d’un nouvel adhésif de plaque. Incuber la plaque 1 heure
à 37±2°C.
4. Lavages
Réitérer l’étape LAVAGES définie précédemment.
5. Révélation
Distribuer 100 µL de solution C - Substrate dans chaque cupule. Agiter doucement la plaque (2 secondes).
Incuber 10 minutes à température ambiante (21±4°C) et à l'obscurité. Ne pas couvrir la plaque.
Distribuer 100 µL de solution D - Stop dans chaque cupule et dans le même ordre que la solution
C - Substrate. Agiter doucement la plaque (2 secondes).
6. Lecture
Essuyer le dessous des plaques, avec un chiffon doux pour éliminer d’éventuelles poussières. Lire la
plaque au maximum 30 minutes après l’arrêt de la réaction, à 450 nm en monochromatisme ou
à 450–620 nm en bichromatisme.
Calcul des résultats
Pour chaque contrôle et chaque échantillon testé, calculer la DO corrigée (DOc) en soustrayant la DO de la
cupule AgC (DO AgC) à la DO de la cupule AgV (DO AgV) :
DOc = DO AgV − DO AgC
NOTE : Pour les échantillons négatifs, il est possible d’obtenir des DOc < 0.
Calculer la DOc moyenne du PC (DOc m PC), et celle du NC (DOc m NC).
Pour chaque échantillon, calculer le ratio E/P (Echantillon/Positif) :
E/P = DOc Enchantillon / DOc m PC
Validation du test
Le test est validé si :
DOc m PC > 0.600 et DOc m NC < 0.150
thermofisher.com/support | thermofisher.com/askaquestion
thermofisher.com
9 décembre 2016
Interprétation des résultats
Résultats
Interprétation
E/P ≤ 0.10
Négatifs
0.10 < E/P < 0.20
Douteux
0.20 ≤ E/P < 0.40
Positif +
0.40 ≤ E/P < 0.60
Positif ++
0.60 ≤ E/P < 0.80
Positif +++
E/P ≥ 0.80
Positif ++++
Les animaux donnant un résultat douteux peuvent
être recontrôlés.
Diagnostic de séroconversion
Dépôt des échantillons
Pour la mise en évidence d’une séroconversion
(variation significative du titre en anticorps anti-
PI3 entre une prise de sang précoce et une prise de
sang tardive) :
• Utiliser des couples d'échantillons (sérum
précoce, sérum tardif) provenant du même
animal.
• Réaliser les analyses des couples d'échantillons
sur la même plaque.
• Suivre le protocole opératoire du kit.
Interprétation des résultats
Pour chaque couple d’échantillons, calculer les
paramètres suivants :
• DOc du Sérum Précoce (DOc PRE)
• DOc du Sérum Tardif (DOc TAR)
• Rapport E/P du Sérum Précoce :
E/P PRE = DOc PRE / DOc m PC
• Rapport E/P du Sérum Tardif :
E/P TAR = DOc TAR / DOc m PC
• Indice de Conversion (IC) du couple
d'échantillon :
IC = DOc TAR / DOc PRE
Une séroconversion est mise en évidence par :
E/P TAR ≥ 0.20 et IC ≥ 2
Documentation et support
Service clientèle et assistance technique
Support technique : rendez-vous sur
thermofisher.com/askaquestion
Visiter thermofisher.com/support pour avoir accès
aux dernières nouveautés relatives aux services et
à l'assistance technique, notamment :
• Numéros de téléphone partout dans le monde
• Commande et Support web
• Guides de l’utilisateur, manuels et protocoles
• Certificats d’analyse
• Fiches de Données de Sécurité (FDS,
également appelées FS (Fiches Signalétiques))
Remarque : Pour les FDS relatives aux réactifs
et aux produits chimiques d'autres fabricants,
contacter chaque fabricant.
Produit à garantie limitée
Life Technologies Corporation et ses filiales
garantissent leurs produits selon les termes et
conditions générales de ventes disponibles sur le
site www.thermofisher.com/us/en/home/global/
terms-and-conditions. Si vous avez des questions,
vous pouvez prendre contact avec Life
Technologies à l'adresse web suivante :
thermofisher.com/support.
Prionics Lelystad B.V. | Platinastraat 33 |
8211 AR Lelystad | The Netherlands
Les informations contenues dans ce guide sont susceptibles d’être
modifiées sans préavis.
CLAUSE DE NON-RESPONSABILITÉ : DANS LA MESURE PERMISE
PAR LA LOI, LIFE TECHNOLOGIES ET/OU SA OU SES FILIALE(S) NE
SAURAIENT ÊTRE TENUES RESPONSABLES DE DOMMAGES
SPÉCIAUX, ACCESSOIRES, INDIRECTS, PUNITIFS, MULTIPLES OU
CONSÉCUTIFS LIÉS AU PRÉSENT DOCUMENT OU A SON USAGE OU
EN RÉSULTANT.
Historique des révisions : Pub. Nº MAN0008365 (français)
Rév.
Date
Description
A.0 9 décembre 2016
Mise à jour sur le modèle du document
en cours, avec mises à jour associées à
la garantie, aux marques et aux logos.
1.0 10 juillet 2013
Base de référence pour l’historique de
révision
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