3M Petrifilm™ E. coli/Coliform Count Plates Mode d'emploi

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Date de parution : 2015-08

Instructions relatives au produit

Test pour la numération des E.coli et Coliformes

Description du Produit et Utilisation Prévue

Le Test 3M™ Petrilm™ pour la numération des E. coli et Coliformes (EC) est un milieu de culture prêt à l'emploi

qui contient des éléments nutritifs VRB (cristal violet, rouge neutre, bile), un agent géliant soluble dans l'eau froide,

un indicateur d'activité glucuronidase, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-glucuronide (BCIG), ainsi qu'un indicateur au

tétrazolium facilitant le dénombrement des colonies. Les Tests 3M Petrilm EC sont utilisés pour la numération des

Escherichia coli (E. coli) et des coliformes, dans les secteurs de l'alimentation et des boissons. Les composants du Test 3M

Petrilm EC sont décontaminés, mais pas stérilisés. 3M Sécurité Alimentaire respecte les normes ISO 9001 en matière de

conception et de fabrication. Les Tests 3M Petrilm EC n'ont pas été testés avec la totalité des produits alimentaires, des

processus de transformation des aliments, des protocoles d'analyse ou des souches possibles de micro-organismes.

Consignes de Sécurité

L'utilisateur doit lire attentivement, comprendre et respecter toutes les consignes de sécurité fournies dans le mode

d'emploi du Test 3M Petrilm EC. Conserver ces consignes de sécurité pour référence ultérieure.

AVERTISSEMENT: indique une situation dangereuse pouvant entraîner un décès, des blessures graves ou des

dommages matériels.

W AVERTISSEMENT

Ne pas utiliser ce test pour la détection de la souche d'E. coli O157. Étant donné que la plupart des souches d'E. coli

O157 sont atypiques, elles sont par exemple glucuronidase négatives, elles ne produiront pas de couleur bleue et ne

seront pas détectées par les Tests 3M Petrilm EC.

An de réduire les risques associés à une exposition à des substances biologiques dangereuses et à une

contamination de l'environnement:

• Suivre les normes industrielles actuelles ainsi que la réglementation locale pour le traitement des déchets contaminés.

An de réduire les risques associés à la diusion de produits contaminés:

• Suivre toutes les instructions relatives à la conservation du produit mentionnées dans les instructions d'utilisation.

• Ne pas utiliser au-delà de la date de péremption.

An de réduire les risques associés à l'infection bactérienne et à la contamination du lieu de travail:

• Eectuer les analyses au moyen du Test 3M Petrilm EC dans un laboratoire correctement équipé, sous la

surveillance d'un microbiologiste compétent.

• L'utilisateur doit former le personnel de manière appropriée aux techniques d'analyse actuelles: par exemple, les

bonnes pratiques de laboratoire

1

, les normes ISO17025

2

ou ISO7218

3

.

An de réduire les risques associés à une mauvaise interprétation des résultats:

• 3M n'a pas documenté l'utilisation de ses Tests 3M Petrilm EC dans des secteurs autres que l'industrie alimentaire

et les boissons. 3M n'a, par exemple, pas documenté l'utilisation de ses Tests 3M Petrilm EC pour l'analyse de l'eau,

des produits pharmaceutiques ou des cosmétiques.

• Ne pas utiliser les Tests 3M Petrilm EC pour réaliser des diagnostics sur l'homme ou l'animal.

• Les Tests 3M Petrilm EC ne permettent pas de faire de distinction entre diérentes souches de micro-organismes.

Consulter la che de données de sécurité du produit pour plus de renseignements.

Pour toute question concernant des applications ou procédures spéciques, consulter notre site Internet à l’adresse

www.3M.com/foodsafety ou contacter le représentant ou distributeur 3M local.

Responsabilité de L’utilisateur

Il incombe aux clients et aux utilisateurs de connaître les instructions et les informations. Veuillez visiter notre site

www.3M.com/foodsafety pour consulter les instructions les plus récentes ou contacter votre représentant ou

distributeur 3M.

Lors du choix d’une méthode de test, il est important d’admettre que des facteurs externes comme les méthodes

d’échantillonnage, lesprotocoles de test, la préparation des échantillons, la manipulation et les techniques de

laboratoires peuvent inuencer les résultats.

Il incombe à l’utilisateur de sélectionner une méthode d’analyse pour évaluer un nombre susant d’échantillons avec

les matrices et les épreuves microbiennes appropriées an de garantir que la méthode d’analyse réponde aux critères

de l’utilisateur.

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Il incombe également à l’utilisateur de déterminer si une méthode d’analyse et ses résultats répondent aux exigences de

ses clients ou fournisseurs.

Comme avec n’importe quelle méthode de test, les résultats obtenus avec ce produit ne constituent pas une garantie de

la qualité des matrices ou des processus testés.

Limitation de garantie/Limites de Recours

SAUF SI EXPRESSÉMENT ÉTABLI DANS LA SECTION DE GARANTIE LIMITÉE D’UN EMBALLAGE DE PRODUIT

INDIVIDUEL, 3M RENONCE À TOUTE GARANTIE EXPLICITE ET IMPLICITE, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER,

TOUTE GARANTIE DE COMMERCIALISATION OU D’ADAPTATION POUR UN USAGE SPÉCIFIQUE. En cas de défaut

de tout produit de Sécurité Alimentaire 3M, 3M ou son distributeur agréé s’engage, à son entière discrétion, au

remplacement ou au remboursement du prix d’achat du produit. Il s’agit de vos recours exclusifs. Tout défaut supposé

du produit devra être notié à 3M dans un délai de soixante jours et le produit renvoyé au fournisseur. Veuillez appeler

le Service clientèle (1-800-328-1671 aux États-Unis) ou votre représentant 3M en produits de microbiologie pour obtenir

une autorisation de renvoi.

Limitation de Responsabilité de 3M

3M NE SERA PAS TENUE RESPONSABLE DES PERTES OU DES DOMMAGES ÉVENTUELS, QU’ILS SOIENT DIRECTS,

INDIRECTS, SPÉCIFIQUES, ACCIDENTELS OU CONSÉCUTIFS, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER, LES PERTES

DE PROFITS. En aucun cas et en aucune manière, laresponsabilité de 3Ms ne sera engagée au-delà du prix d’achat du

produit prétendu défectueux.

Stockage

Conserver les poches de Tests 3M Petrilm EC non ouvertes, réfrigérées ou congelées, à des températures inférieures

ou égales à 8°C (46°F). Immédiatement avant utilisation, les laisser atteindre la température ambiante avant de les

ouvrir. Replacer les Tests 3M Petrilm EC non utilisés dans leur poche. Refermer hermétiquement les poches ouvertes

avec un ruban adhésif, après avoir plié sur lui-même le côté ouvert. Ne pas réfrigérer les poches ouvertes pour éviter

une exposition à l'humidité. Conserver les poches refermées dans un endroit frais et sec quatre semaines au maximum.

Lorsque la température d'un laboratoire dépasse 25°C (77°F), et/ou que ce laboratoire est situé dans une région où

l'humidité relative dépasse 50% (à l'exception des locaux climatisés), il est recommandé de conserver les poches de

Tests 3M Petrilm EC refermées au congélateur, comme indiqué ci-dessous.

Pour conserver les poches ouvertes de Tests 3M Petrilm EC dans un congélateur, les placer dans un récipient étanche.

Pour utiliser des Tests 3M Petrilm EC congelés, sortir les tests à utiliser de leur récipient et remettre immédiatement

les tests restants dans le congélateur, après les avoir replacés dans le récipient étanche. Les Tests 3M Petrilm EC ne

doivent pas être utilisés après leur date de péremption. Le congélateur utilisé pour la conservation des poches ouvertes

ne doit pas posséder de cycle de dégivrage automatique; en eet, les tests pourraient être endommagés en raison

d'une exposition répétée à l'humidité.

Ne pas utiliser les Tests 3M Petrilm EC qui présentent des signes de décoloration. La date de péremption et le numéro

de lot gurent sur chacune des poches de Tests 3M Petrilm EC. Le numéro de lot est également indiqué sur chaque

Test 3M Petrilm EC.

Mise au Rebut

Après usage, les Tests 3M Petrilm EC peuvent contenir des micro-organismes susceptibles de présenter un risque

biologique. Respecter les normes en vigueur concernant l'élimination des déchets.

Instructions D’utilisation

Préparation de l'échantillon

1. Utiliser des diluants stériles appropriés:

Eau de dilution tamponnée au phosphate Buttereld

4

, eau peptonée à 0,1%, diluant peptone-sel, solution de Ringer

diluée au quart, solution saline (0,85– 0,90%), bouillon de Letheen sans bisulte ou eau distillée.

Ne pas utiliser de diluants contenant du citrate, du bisulte ou du thiosulfate avec les Tests 3M Petrilm EC,

car ils peuvent inhiber la croissance. Si une solution tampon au citrate est indiquée dans la procédure standard, la

remplacer par l'un des tampons cités plus haut, réchaué à une température de 40 à 45°C.

2. Mélanger ou homogénéiser l'échantillon.

3. Pour obtenir des conditions de croissance et de recouvrement optimales des micro-organismes, ajuster le pH de

l'échantillon dilué entre 6,6 et 7,2. Pour les produits acides, ajuster le pH avec NaOH 1 N. Pour les produits alcalins,

ajuster le pH avec HCl 1 N.

Utilisation des tests

1. Placer le Test 3M Petrilm EC sur une surface de travail plane et régulière.

2. Soulever le lm supérieur et, en tenant la pipette perpendiculairement à la zone d'inoculation, déposer 1ml

d'échantillon dilué au centre du lm inférieur.

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3. Recouvrir délicatement l'échantillon avec le lm supérieur pour éviter de piéger des bulles d'air.

4. Placer le 3M™ Petrilm™ Diuseur face plane au contact du test, et au centre du test. Répartir l'échantillon

uniformément en exerçant une légère pression au centre du 3M Petrilm Diuseur. Répartir l'inoculum sur la totalité

de la zone de croissance du Test 3M Petrilm EC, avant que le gel ne se forme. Ne pas faire glisser le 3M Petrilm

Diuseur sur le lm.

5. Retirer le 3M Petrilm Diuseur et laisser reposer le Test 3M Petrilm EC durant au moins une minute, an de laisser

le gel se former.

Incubation

Laisser incuber les Tests 3M Petrilm EC à l'horizontale, lm transparent vers le haut, en veillant à ne pas empiler plus de

20tests. Plusieurs durées et températures d'incubation peuvent être utilisées en fonction des méthodes de référence locales

en vigueur. Certaines d'entre elles sont répertoriées dans la section «Instructions spéciques pour méthodes validées».

Interprétation

1. La numération à l'aide des Tests 3M Petrilm EC peut se faire au moyen d'un compteur de colonies standard ou d'une

autre loupe à éclairage. Ne pas dénombrer les colonies présentes sur le pourtour en mousse, la sélectivité du milieu y

étant modiée. Ne pas tenir compte des bulles artefacts qui étaient éventuellement présentes avant l'incubation.

L'interprétation des colonies d'E. coli à l'aide du Test 3M Petrilm EC s'eectue de la manière suivante:

AOAC Ocial Methods (998.08 et 991.14): compter les colonies bleues à rouge-bleu associées à des bulles de gaz

comme des E. coli conrmés, quelle que soit la taille ou l'intensité de la couleur. Les colonies bleues sans bulles de

gaz ne sont pas des E. coli.

Les autres colonies de coliformes sont rouges et sont étroitement associées à des bulles de gaz (situées à une

distance inférieure ou égale au diamètre de la colonie). Les colonies non associées à des bulles de gaz (ou qui sont

éloignées des bulles d'une distance supérieure au diamètre de la colonie) ne sont pas comptées comme coliformes.

Le nombre total de coliformes est égal à la somme des colonies rouges et bleues associées à des bulles de gaz

après 24heures. Au cours de la période d'incubation (variable selon la méthode validée choisie), toute colonie bleue

associée à des bulles de gaz correspond à des E. coli conrmés.

W AVERTISSEMENT

Ne pas utiliser ce test pour la détection de la souche d'E. coli O157. Étant donné que la plupart des souches d'E. coli

O157 sont atypiques, elles sont par exemple glucuronidase négatives, elles ne produiront pas de couleur bleue et ne

seront pas détectées comme étant des E-coli par les Tests 3M Petrilm EC.

2. La zone de croissance circulaire est de 20cm

2

environ. Des estimations sont possibles sur les tests contenant plus

de 150colonies en comptant le nombre de colonies dans un ou plusieurs carrés représentatifs et en déterminant le

nombre moyen par carré. Multiplier ce nombre moyen par 20 pour déterminer le nombre estimé par test.

3. Lorsque le nombre de colonies est élevé, les Tests 3M Petrilm EC peuvent présenter une ou plusieurs des

caractéristiques suivantes: un assombrissement de la couleur du gel, associé à un grand nombre de petites colonies

indistinctes et de bulles de gaz. De fortes concentrations d'E. coli entraîneront une coloration bleue de la zone de

croissance, tandis que de fortes concentrations de coliformes (autres que E. coli) entraîneront une coloration rouge

foncé de la zone de croissance. Lorsque l'un de ces phénomènes se produit, enregistrer le résultat comme incomptable.

Lorsqu'un dénombrement plus précis est requis, recommencer l'analyse sur des dilutions plus élevées de l'échantillon.

4. Si nécessaire, les colonies peuvent être isolées pour être identiées. Soulever le lm supérieur selon une technique

d'analyse appropriée et prélever la colonie de la surface du gel. Utiliser les procédures standard d'analyse.

5. Si les tests ne peuvent pas être lus dans l'heure qui suit leur sortie de l'incubateur, ils peuvent être stockés congelés,

dans un récipient étanche, à une température inférieure ou égale à -15°C, pendant une semaine au maximum, pour

permettre d'en diérer la lecture.

Pour toute information complémentaire, se reporter au «Guide d'interprétation du Test 3M™ Petrilm™ pour la

numération des E. coli et coliformes». Pour toute question concernant des applications ou procédures spéciques,

consulter notre site Internet à l'adresse www.3M.com/foodsafety, ou contacter le représentant ou distributeur 3M local.

Instructions spéciques pour méthodes validées

AOAC® Ocial Methods

SM

(998.08 Méthode de numération d'Escherichia coli conrmés, dans la volaille, la viande et

les fruits de mer, sur lm sec réhydratable)

Laisser incuber les Tests 3M Petrilm EC pendant 24heures ±2heures à 35°C ±1°C.

AOAC® Ocial Methods

SM

(991.14 Méthodes de numération des coliformes et des Escherichia coli dans tout type

d'aliments sur lm sec réhydratable)

Pour la détection de coliformes, incuber les Tests 3M Petrilm EC pendant 24 heures ±2 heures à 35 °C ± 1 °C.

Pour la détection des E.coli, incuber les Tests 3M Petrilm EC pendant encore 24 heures ±2 heures (soit 48heures ±4

heures au total) à 35 °C ± 1 °C.

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