Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit Mode d'emploi

Marque
Thermo Fisher Scientific
Modèle
PrioCHECK Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit
Taper
Mode d'emploi
NOTICE D’UTILISATION
Réservé à l’usage vétérinaire. Usage in vitro exclusivement.
PrioCHECK™ Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit
Test immunoenzymatique de détection spécifique des anticorps anti-p80 de BVDV et
BDV dans le sérum et le lait de ruminant
Référence Catalogue BVDIL5
Partie Nº 100020236 Pub. Nº MAN0007462 Rév. B.0
IMPORTANT ! En France, seulement la matrice lait a été approuvée par l'ANSES dans le cadre du Programme Francais d'Eradication BVD.
Technique
Espèce
Matrice
Test
Protocole
(1)
ELISA blocking monocupule
- Plaques sécables;
protocoles d'incubation
longue et courte
Bovin
Sérum
Individuel
IC, IL
Mélange
IL
Lait
Individuel
IL
De mélange
Ovin Sérum
Individuel
IC, IL
Mélange
IL
(1) IC : Incubation courte ; IL : Incubation longue
AVERTISSEMENT!
Lire les fiches de données de sécurité (FDS) et suivre les consignes de
manipulation. Porter des lunettes de sécurité, des gants et des vêtements appropriés. Les fiches de
données de sécurité (FDS) sont disponibles à l’adresse thermofisher.com/support.
AVERTISSEMENT ! RISQUES BIOLOGIQUES POTENTIELS. Lire les informations de sécurité relatives
aux risques biologiques du produit disponibles sur thermofisher.com. Porter des lunettes de
sécurité, des gants et des vêtements appropriés.
Informations générales
Le virus de la diarrhée Virale Bovine (BVDV) est un virus appartenant au genre des Pestivirus de la famille
des Flaviviridae. Deux autres virus animaux appartiennent au même genre des Pestivirus : le virus de la
Border Disease (BDV) chez le mouton et le virus de la Peste Porcine Classique (PPC ou CSF) chez le porc.
Le BVDV est l'un des virus pathogènes les plus importants chez le bétail, causant des pertes importantes
dans les industries laitières et à viande dans le monde entier. Le virus traverse le placenta chez les vaches
gestantes infectées, provoquant des pertes de reproduction dues à des avortements, des veaux mort-nés
ou des veaux qui meurent tôt. Certains veaux qui survivent sont immunotolérants au virus et ces animaux
excrètent de grandes quantités de virus infectieux pour le reste de leur vie. Il est important d'identifier ces
animaux porteurs pour briser le cycle des infections dans les troupeaux. Les animaux porteurs meurent
souvent de la maladie des muqueuses dans les 2 premières années de la vie.
Le diagnostic du BVDV par détection des anticorps spécifiques a de nombreuses indications :
• Mise en évidence d’une circulation virale au sein d’un cheptel
• Prédétection des animaux infectés permanents immunotolérants (IPI)
• Surveillance des troupeaux après élimination des IPI
• Réalisation d’enquêtes épidémiologiques.
Applied Biosystems™ PrioCHECK™ Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit est utilisable sur les échantillons
suivants :
• Sérums individuels et mélanges de sérums bovins et ovins pour détecter les anticorps anti-BVDV et anti-BDV.
• Laits individuels et de mélange bovins pour détecter des anticorps anti-BVDV.
Principe du test
Le test est basé sur le principe d’un ELISA compétition (ou blocking).
1. Les échantillons et les contrôles sont déposés dans la plaque sensibilisée avec de l'antigène (Ag)
BVD/BD. Les anticorps spécifiques du BVD/BD éventuellement présents se lient à l’Ag.
2. Après lavage, un conjugué (anticorps monoclonal anti-p80) marqué à la peroxydase est ajouté et se
fixe sur les sites antigéniques laissés libres.
3. Le conjugué non fixé est éliminé par lavage avant addition d’un substrat chromogène. L’apparition
d’une coloration bleue est la conséquence de l'oxydation du substrat par la peroxydase du conjugué.
4. Après arrêt de la réaction, la coloration devient jaune. La lecture des résultats est réalisée par un
lecteur de plaques ELISA.
L'absence de coloration ou une très faible coloration indique un échantillon positif.
2 PrioCHECK™ Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit Notice d’Utilisation
Réactifs du kit et conservation
Composant Description
Quantité
(480 tests)
Conser-
vation
1 - Coated microplate BVD
Plaque sensibilisée BVD, 12 barrettes de 8 cupules
5 unités
5±3°C(1)
2a - Serum Negative C. BVD
Contrôle négatif sérum BVD (NC)
1 mL
5±3°C
2b - Milk Negative C. BVD
Contrôle négatif lait BVD (NC)
2 mL
3a - Serum Positive C. BVD
Contrôle positif sérum BVD (PC)
1 mL
3b - Milk Positive C. BVD
Contrôle positif lait BVD (PC)
2 mL
4 - Conjugate BVD
Conjugué BVD (rose), anti-p80 HRP
60 mL
A - Wash (10x)
Solution de lavage, 10 fois concentrée
250 mL
B - Sample DB BVD
Diluant échantillon BVD (vert)
60 mL
C - Substrate
Solution Substrat
60 mL
D - Stop
Solution d’arrêt
60 mL
Adhésifs de plaques
10
TA(2)
(1) Les barrettes non utilisées peuvent être stockées dans le sachet fermé avec dessicant (fournis dans le kit) à 5±3°C jusqu’à la
date de péremption du kit.
(2) Température ambiante
Matériel et réactifs requis pour l’analyse non fournis dans le kit
Sauf indication contraire, tous les produits sont disponibles sur thermofisher.com.
Micropipettes monocanales et multicanaux
Embouts de pipette à usage unique
Eau distillée ou déionisée
Incubateur de microplaque (37±2°C)
Lecteur ELISA équipé d’un filtre à 450 nm ou de filtres à 450 et 620 nm
Réservoirs à usage unique
Précautions d’emploi
• Ne pas mélanger des réactifs provenant de différents lots de kits.
• Eviter la contamination des réactifs en utilisant du matériel de prélèvement à usage unique.
• Ne pas pipeter les réactifs avec la bouche.
Préparation des échantillons
Des sérums ou laits frais, réfrigérés (8 jours à 5±3°C) ou congelés (1 an à < –16°C) sont utilisables.
Les laits peuvent contenir ou non un conservateur. Privilégier les laits non congelés.
Les échantillons sont préalablement homogénéisés.
• Les sérums individuels et les contrôles sont testés dilués au 1:10 (incubation courte ou longue).
• Mélange de sérums réalisés par lot d’animaux prélevés au sein d’un même élevage (incubation
longue seulement) :
- Pour une application épidémiologique dont l’objectif est l’évaluation d’une prévalence positive au
sein de lots d’animaux homogènes (mélange de 2 à 20 sérums), les mélanges de sérums et les
contrôles sont testés dilués au 1:20.
- Pour une application diagnostique dont l’objectif est la détection d’au moins un animal séropositif
dans un mélange de 2 à 10 sérums, les mélanges de sérums et les contrôles sont testés dilués au 1:2.
• Les laits individuels et de mélange et les contrôles sont testés dilués au 1:2 en Wash diluée
(incubation longue seulement).
NOTE : Il est fortement conseillé d’utiliser un traceur interne pour chaque manipulation. Des références
internes (Réf. RBVD pour le sérum ou BVDSET pour le lait) sont disponibles.
Préparation des réactifs
• Les réactifs 1 - Coated microplate BVD, B - Sample DB BVD, 4 - Conjugate BVD, C - Substrate et
D - Stop sont prêts à l’emploi.
• Les réactifs 2a - Serum Negative C. BVD, 2b - Milk Negative C. BVD, 3a - Serum Positive C. BVD et
3b - Milk Positive C. BVD sont à tester comme les échantillons.
• La solution de lavage A - Wash (10x) est à diluer au 1:10 dans de l'eau distillée/déionisée.
Exemple : pour une barrette : 2 mL de solution A - Wash (10x) dans 18 mL d'eau ; pour une plaque :
25 mL de solution A - Wash (10x) dans 225 mL d’eau.
Mélanger après dilution. La solution Wash diluée peut être conservée 1 mois à 5±3°C.
PrioCHECK™ Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit Notice d’Utilisation 3
NOTE: Du fait d’une forte concentration en sels, des cristaux peuvent se former dans la solution
A - Wash (10x). Les cristaux peuvent être dissous sous agitation. Il est recommandé d’homogénéiser la
solution avant dilution.
Réalisation du test ELISA
NOTE: Porter les réactifs à température ambiante (21±4°C) avant la réalisation du test. La zone de
tolérance des temps d’incubation est de ±10%. Il est recommandé d’utiliser des réservoirs à usage unique
pour la distribution des composants.
1. Distribution des contrôles et des échantillons
A. Echantillon sérum individuel (dilution au 1:10)
• Distribuer 10 µL du réactif 3a - Serum Positive C. BVD dans les cupules A1 et B1 (par exemple).
• Distribuer 10 µL du réactif 2a - Serum Negative C. BVD dans les cupules C1 et D1 (par exemple).
• Distribuer 10 µL de sérum à analyser dans les cupules suivantes.
• Distribuer 90 µL de réactif B - Sample DB BVD dans chaque cupule contenant les contrôles et les
échantillons.
B1. Echantillon mélange de sérums - Application épidémiologique (dilution au 1:20)
• Distribuer 5 µL du réactif 3a - Serum Positive C. BVD dans les cupules A1 et B1 (par exemple).
• Distribuer 5 µL du réactif 2a - Serum Negative C. BVD dans les cupules C1 et D1 (par exemple).
• Distribuer 5 µL de mélange de sérums à analyser dans les cupules suivantes.
• Distribuer 95 µL de réactif B - Sample DB BVD dans chaque cupule contenant les contrôles et les
échantillons.
B2. Echantillon mélange de sérums - Application diagnostique (dilution au 1:2)
• Distribuer 50 µL du réactif 3a - Serum Positive C. BVD dans les cupules A1 et B1 (par exemple).
• Distribuer 50 µL du réactif 2a - Serum Negative C. BVD dans les cupules C1 et D1 (par exemple).
• Distribuer 50 µL de mélange de sérums à analyser dans les cupules suivantes.
• Distribuer 50 µL de réactif B - Sample DB BVD dans chaque cupule contenant les contrôles et les
échantillons.
C. Echantillon de laits individuels ou de mélange
• Distribuer 50 µL du réactif 3b - Milk Positive C. BVD dans les cupules A1 et B1 (par exemple).
• Distribuer 50 µL du réactif 2b - Milk Negative C. BVD dans les cupules C1 et D1 (par exemple).
• Distribuer 50 µL de lait individuel ou de mélange dans les cupules suivantes.
• Distribuer 50 µL de solution Wash diluée (1X) (voir "Préparation des réactifs") dans chaque cupule
contenant les contrôles et les échantillons.
Agiter doucement la plaque puis la couvrir à l’aide d’un adhésif de plaque.
Analyse sérum individuel : Incuber la plaque 1 nuit (16 à 18h) à 5±3°C ou 1 heure à 37±2°C.
NOTE : le kit présente une meilleure détectabilité en incubation longue.
Analyse mélange de sérums et laits individuels ou de mélange : Incuber la plaque 1 nuit (16 à 18h) à 5±3°C.
2. Lavages
Vider la plaque et réaliser 4 lavages avec la solution Wash diluée (voir “Préparation des réactifs”) à raison
de 300 µL par cupule. Vider et tapoter la plaque sur un papier absorbant pour éliminer toute trace de
liquide. Les lavages sont réalisables, au choix, manuellement ou au laveur automatique. Ne pas laisser
sécher les plaques.
3. Distribution du conjugué
Distribuer 100 µL de réactif 4 - Conjugate BVD dans chaque cupule. Agiter doucement et couvrir la
plaque à l’aide d’un nouvel adhésif de plaque. Incuber la plaque 1 heure à 37±2°C.
4. Lavages
Réitérer l’étape LAVAGES définie précédemment.
5. Révélation
Distribuer 100 µL de solution C - Substrate dans chaque cupule. Agiter doucement la plaque (2 secondes).
Incuber 10 minutes à température ambiante (21±4°C) et à l'obscurité. Ne pas couvrir la plaque.
Distribuer 100 µL de solution D - Stop dans chaque cupule et dans le même ordre que la solution
C - Substrate. Agiter doucement la plaque (2 secondes).
6. Lecture
Essuyer le dessous des plaques, avec un chiffon doux pour éliminer d’éventuelles poussières. Lire la
plaque au maximum 30 minutes après l’arrêt de la réaction, à 450 nm en monochromatisme ou à
450−620 nm en bichromatisme.
thermofisher.com/support | thermofisher.com/askaquestion
thermofisher.com
27 septembre 2019
Calcul des résultats
Calculer la DO moyenne du PC (DOm PC), et celle
du NC (DOm NC).
Pour chaque échantillon, calculer le pourcentage
d’inhibition (% Inh) :
% Inh = [ (DOm NC − DO Echantillon) / DOm NC ] × 100
NOTE: Pour les échantillons négatifs, il est possible
d’obtenir des % Inh < 0.
Validation du test
Le test est validé si :
% Inh PC > 60% et DOm NC > 0.650
Interprétation des résultats
Table 1 Sérum individuel
Résultats
Interprétation
quantitative
Interprétation
qualitative
% Inh < 50
-
Négatif
50 ≤ % Inh < 80
+
Faible positif
% Inh ≥ 80
++
Fort positif
Table 2 Mélange de 2 à 20 sérums –
Protocole 1:20 - Application épidémiologique
Résultats
% Séroprévalence
Interprétation
% Inh < 65
La prévalence
positive / Ac p80
est faible, généra-
lement < à 50%
Risque de
circulation virale
nul ou faible
% Inh ≥ 65
La prévalence
positive / Ac p80
est forte, généra-
lement > à 50%
Suspicion de
passage viral. Fort
risque de présence
d’animaux IPI ou
virémiques
transitoires
Table 3 Mélange de 2 à 10 sérums –
Protocole 1:2 - Application diagnostique
Résultats
Interprétation
qualitative
Statut
% Inh < 30
Négatif
Non infecté
% Inh ≥ 30 Positif
Récemment
infecté ou infecté
Table 4 Lait individuel (bovins)
Résultats
Interprétation qualitative
% Inh < 30
Négatif
% Inh ≥ 30
Positif
Table 5 Lait de mélange (bovins)
Résultats
Interprétation
qualitative
Prévalence d’
animaux positifs (P)
% Inh < 35
Négatif
P < 10%
35 ≤ % Inh < 60
Positif +
10% ≤ P < 30%
% Inh ≥ 60
Positif ++
P ≥ 30%
Documentation et support
Service clientèle et assistance technique
Support technique : rendez-vous sur
thermofisher.com/askaquestion
Visiter thermofisher.com/support pour avoir accès
aux dernières nouveautés relatives aux services et
à l'assistance technique, notamment :
• Numéros de téléphone partout dans le monde
• Commande et Support web
• Guides de l’utilisateur, manuels et protocoles
• Certificats d’analyse
• Fiches de Données de Sécurité (FDS,
également appelées FS (Fiches Signalétiques))
Remarque: Pour les FDS relatives aux réactifs
et aux produits chimiques d'autres fabricants,
contacter chaque fabricant.
Produit à garantie limitée
Life Technologies Corporation et ses filiales
garantissent leurs produits selon les termes et
conditions générales de ventes disponibles sur le
site www.thermofisher.com/us/en/home/global/
terms-and-conditions. Si vous avez des questions,
vous pouvez prendre contact avec Life
Technologies à l'adresse web suivante :
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8211 AR Lelystad | The Netherlands
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CONSÉCUTIFS LIÉS AU PRÉSENT DOCUMENT OU A SON USAGE OU
EN RÉSULTANT.
Historique des révisions : Pub. N° MAN0007462 (français)
Rév.
Date
Description
B.0 27 septembre
2019
• Ajout de la déclaration concernant
l'approbation par l'Anses des
échantillons de lait pour le Programme
Francais d'Eradication BVD.
• Mise à jour des informations de licence
limitée.
A.0 15 juillet 2016
Mise à jour sur le modèle du document en
cours, avec mises à jour associées à la
garantie, aux marques et aux logos.
1.0 1 mars 2013
Base de référence pour l’historique de
révision
Informations importantes sur les licences : Ces produits peuvent
être couverts par une ou plusieurs licences à usage limité. En
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toutes les licences à usage limité.
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