Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit Mode d'emploi

Marque: Thermo Fisher Scientific

Modèle: PrioCHECK Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit

Taper: Mode d'emploi

NOTICE D’UTILISATION

Réservé à l’usage vétérinaire. Usage in vitro exclusivement.

PrioCHECK™ Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit

Test immunoenzymatique de détection spécifique des anticorps anti-p80 de BVDV et

BDV dans le sérum et le lait de ruminant

Référence Catalogue BVDIL5

Partie Nº 100020236 Pub. Nº MAN0007462 Rév. B.0

IMPORTANT ! En France, seulement la matrice lait a été approuvée par l'ANSES dans le cadre du Programme Francais d'Eradication BVD.

Technique

Espèce

Matrice

Test

Protocole

(1)

ELISA blocking monocupule

- Plaques sécables;

protocoles d'incubation

longue et courte

Bovin

Sérum

Individuel

IC, IL

Mélange

Lait

Individuel

De mélange

Ovin Sérum

Individuel

IC, IL

Mélange

(1) IC : Incubation courte ; IL : Incubation longue

AVERTISSEMENT!

Lire les fiches de données de sécurité (FDS) et suivre les consignes de

manipulation. Porter des lunettes de sécurité, des gants et des vêtements appropriés. Les fiches de

données de sécurité (FDS) sont disponibles à l’adresse thermofisher.com/support.

AVERTISSEMENT ! RISQUES BIOLOGIQUES POTENTIELS. Lire les informations de sécurité relatives

aux risques biologiques du produit disponibles sur thermofisher.com. Porter des lunettes de

sécurité, des gants et des vêtements appropriés.

Informations générales

Le virus de la diarrhée Virale Bovine (BVDV) est un virus appartenant au genre des Pestivirus de la famille

des Flaviviridae. Deux autres virus animaux appartiennent au même genre des Pestivirus : le virus de la

Border Disease (BDV) chez le mouton et le virus de la Peste Porcine Classique (PPC ou CSF) chez le porc.

Le BVDV est l'un des virus pathogènes les plus importants chez le bétail, causant des pertes importantes

dans les industries laitières et à viande dans le monde entier. Le virus traverse le placenta chez les vaches

gestantes infectées, provoquant des pertes de reproduction dues à des avortements, des veaux mort-nés

ou des veaux qui meurent tôt. Certains veaux qui survivent sont immunotolérants au virus et ces animaux

excrètent de grandes quantités de virus infectieux pour le reste de leur vie. Il est important d'identifier ces

animaux porteurs pour briser le cycle des infections dans les troupeaux. Les animaux porteurs meurent

souvent de la maladie des muqueuses dans les 2 premières années de la vie.

Le diagnostic du BVDV par détection des anticorps spécifiques a de nombreuses indications :

• Mise en évidence d’une circulation virale au sein d’un cheptel

• Prédétection des animaux infectés permanents immunotolérants (IPI)

• Surveillance des troupeaux après élimination des IPI

• Réalisation d’enquêtes épidémiologiques.

Applied Biosystems™ PrioCHECK™ Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit est utilisable sur les échantillons

suivants :

• Sérums individuels et mélanges de sérums bovins et ovins pour détecter les anticorps anti-BVDV et anti-BDV.

• Laits individuels et de mélange bovins pour détecter des anticorps anti-BVDV.

Principe du test

Le test est basé sur le principe d’un ELISA compétition (ou blocking).

1. Les échantillons et les contrôles sont déposés dans la plaque sensibilisée avec de l'antigène (Ag)

BVD/BD. Les anticorps spécifiques du BVD/BD éventuellement présents se lient à l’Ag.

2. Après lavage, un conjugué (anticorps monoclonal anti-p80) marqué à la peroxydase est ajouté et se

fixe sur les sites antigéniques laissés libres.

3. Le conjugué non fixé est éliminé par lavage avant addition d’un substrat chromogène. L’apparition

d’une coloration bleue est la conséquence de l'oxydation du substrat par la peroxydase du conjugué.

4. Après arrêt de la réaction, la coloration devient jaune. La lecture des résultats est réalisée par un

lecteur de plaques ELISA.

L'absence de coloration ou une très faible coloration indique un échantillon positif.

2 PrioCHECK™ Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit Notice d’Utilisation

Réactifs du kit et conservation

Composant Description

Quantité

(480 tests)

Conser-

vation

1 - Coated microplate BVD

Plaque sensibilisée BVD, 12 barrettes de 8 cupules

5 unités

5±3°C(1)

2a - Serum Negative C. BVD

Contrôle négatif sérum BVD (NC)

1 mL

5±3°C

2b - Milk Negative C. BVD

Contrôle négatif lait BVD (NC)

2 mL

3a - Serum Positive C. BVD

Contrôle positif sérum BVD (PC)

1 mL

3b - Milk Positive C. BVD

Contrôle positif lait BVD (PC)

2 mL

4 - Conjugate BVD

Conjugué BVD (rose), anti-p80 HRP

60 mL

A - Wash (10x)

Solution de lavage, 10 fois concentrée

250 mL

B - Sample DB BVD

Diluant échantillon BVD (vert)

60 mL

C - Substrate

Solution Substrat

60 mL

D - Stop

Solution d’arrêt

60 mL

Adhésifs de plaques

TA(2)

(1) Les barrettes non utilisées peuvent être stockées dans le sachet fermé avec dessicant (fournis dans le kit) à 5±3°C jusqu’à la

date de péremption du kit.

(2) Température ambiante

Matériel et réactifs requis pour l’analyse non fournis dans le kit

Sauf indication contraire, tous les produits sont disponibles sur thermofisher.com.

Micropipettes monocanales et multicanaux

Embouts de pipette à usage unique

Eau distillée ou déionisée

Incubateur de microplaque (37±2°C)

Lecteur ELISA équipé d’un filtre à 450 nm ou de filtres à 450 et 620 nm

Réservoirs à usage unique

Précautions d’emploi

• Ne pas mélanger des réactifs provenant de différents lots de kits.

• Eviter la contamination des réactifs en utilisant du matériel de prélèvement à usage unique.

• Ne pas pipeter les réactifs avec la bouche.

Préparation des échantillons

Des sérums ou laits frais, réfrigérés (8 jours à 5±3°C) ou congelés (1 an à < –16°C) sont utilisables.

Les laits peuvent contenir ou non un conservateur. Privilégier les laits non congelés.

Les échantillons sont préalablement homogénéisés.

• Les sérums individuels et les contrôles sont testés dilués au 1:10 (incubation courte ou longue).

• Mélange de sérums réalisés par lot d’animaux prélevés au sein d’un même élevage (incubation

longue seulement) :

- Pour une application épidémiologique dont l’objectif est l’évaluation d’une prévalence positive au

sein de lots d’animaux homogènes (mélange de 2 à 20 sérums), les mélanges de sérums et les

contrôles sont testés dilués au 1:20.

- Pour une application diagnostique dont l’objectif est la détection d’au moins un animal séropositif

dans un mélange de 2 à 10 sérums, les mélanges de sérums et les contrôles sont testés dilués au 1:2.

• Les laits individuels et de mélange et les contrôles sont testés dilués au 1:2 en Wash diluée

(incubation longue seulement).

NOTE : Il est fortement conseillé d’utiliser un traceur interne pour chaque manipulation. Des références

internes (Réf. RBVD pour le sérum ou BVDSET pour le lait) sont disponibles.

Préparation des réactifs

• Les réactifs 1 - Coated microplate BVD, B - Sample DB BVD, 4 - Conjugate BVD, C - Substrate et

D - Stop sont prêts à l’emploi.

• Les réactifs 2a - Serum Negative C. BVD, 2b - Milk Negative C. BVD, 3a - Serum Positive C. BVD et

3b - Milk Positive C. BVD sont à tester comme les échantillons.

• La solution de lavage A - Wash (10x) est à diluer au 1:10 dans de l'eau distillée/déionisée.

Exemple : pour une barrette : 2 mL de solution A - Wash (10x) dans 18 mL d'eau ; pour une plaque :

25 mL de solution A - Wash (10x) dans 225 mL d’eau.

Mélanger après dilution. La solution Wash diluée peut être conservée 1 mois à 5±3°C.

PrioCHECK™ Rum. BVD p80 Ab Serum & Milk Kit Notice d’Utilisation 3

NOTE: Du fait d’une forte concentration en sels, des cristaux peuvent se former dans la solution

A - Wash (10x). Les cristaux peuvent être dissous sous agitation. Il est recommandé d’homogénéiser la

solution avant dilution.

Réalisation du test ELISA

NOTE: Porter les réactifs à température ambiante (21±4°C) avant la réalisation du test. La zone de

tolérance des temps d’incubation est de ±10%. Il est recommandé d’utiliser des réservoirs à usage unique

pour la distribution des composants.

1. Distribution des contrôles et des échantillons

A. Echantillon sérum individuel (dilution au 1:10)

• Distribuer 10 µL du réactif 3a - Serum Positive C. BVD dans les cupules A1 et B1 (par exemple).

• Distribuer 10 µL du réactif 2a - Serum Negative C. BVD dans les cupules C1 et D1 (par exemple).

• Distribuer 10 µL de sérum à analyser dans les cupules suivantes.

• Distribuer 90 µL de réactif B - Sample DB BVD dans chaque cupule contenant les contrôles et les

échantillons.

B1. Echantillon mélange de sérums - Application épidémiologique (dilution au 1:20)

• Distribuer 5 µL du réactif 3a - Serum Positive C. BVD dans les cupules A1 et B1 (par exemple).

• Distribuer 5 µL du réactif 2a - Serum Negative C. BVD dans les cupules C1 et D1 (par exemple).

• Distribuer 5 µL de mélange de sérums à analyser dans les cupules suivantes.

• Distribuer 95 µL de réactif B - Sample DB BVD dans chaque cupule contenant les contrôles et les

échantillons.

B2. Echantillon mélange de sérums - Application diagnostique (dilution au 1:2)

• Distribuer 50 µL du réactif 3a - Serum Positive C. BVD dans les cupules A1 et B1 (par exemple).

• Distribuer 50 µL du réactif 2a - Serum Negative C. BVD dans les cupules C1 et D1 (par exemple).

• Distribuer 50 µL de mélange de sérums à analyser dans les cupules suivantes.

• Distribuer 50 µL de réactif B - Sample DB BVD dans chaque cupule contenant les contrôles et les

échantillons.

C. Echantillon de laits individuels ou de mélange

• Distribuer 50 µL du réactif 3b - Milk Positive C. BVD dans les cupules A1 et B1 (par exemple).

• Distribuer 50 µL du réactif 2b - Milk Negative C. BVD dans les cupules C1 et D1 (par exemple).

• Distribuer 50 µL de lait individuel ou de mélange dans les cupules suivantes.

• Distribuer 50 µL de solution Wash diluée (1X) (voir "Préparation des réactifs") dans chaque cupule

contenant les contrôles et les échantillons.

Agiter doucement la plaque puis la couvrir à l’aide d’un adhésif de plaque.

Analyse sérum individuel : Incuber la plaque 1 nuit (16 à 18h) à 5±3°C ou 1 heure à 37±2°C.

NOTE : le kit présente une meilleure détectabilité en incubation longue.

Analyse mélange de sérums et laits individuels ou de mélange : Incuber la plaque 1 nuit (16 à 18h) à 5±3°C.

2. Lavages

Vider la plaque et réaliser 4 lavages avec la solution Wash diluée (voir “Préparation des réactifs”) à raison

de 300 µL par cupule. Vider et tapoter la plaque sur un papier absorbant pour éliminer toute trace de

liquide. Les lavages sont réalisables, au choix, manuellement ou au laveur automatique. Ne pas laisser

sécher les plaques.

3. Distribution du conjugué

Distribuer 100 µL de réactif 4 - Conjugate BVD dans chaque cupule. Agiter doucement et couvrir la

plaque à l’aide d’un nouvel adhésif de plaque. Incuber la plaque 1 heure à 37±2°C.

4. Lavages

Réitérer l’étape LAVAGES définie précédemment.

5. Révélation

Distribuer 100 µL de solution C - Substrate dans chaque cupule. Agiter doucement la plaque (2 secondes).

Incuber 10 minutes à température ambiante (21±4°C) et à l'obscurité. Ne pas couvrir la plaque.

Distribuer 100 µL de solution D - Stop dans chaque cupule et dans le même ordre que la solution

C - Substrate. Agiter doucement la plaque (2 secondes).

6. Lecture

Essuyer le dessous des plaques, avec un chiffon doux pour éliminer d’éventuelles poussières. Lire la

plaque au maximum 30 minutes après l’arrêt de la réaction, à 450 nm en monochromatisme ou à

450−620 nm en bichromatisme.

thermofisher.com/support | thermofisher.com/askaquestion

thermofisher.com

27 septembre 2019

Calcul des résultats

Calculer la DO moyenne du PC (DOm PC), et celle

du NC (DOm NC).

Pour chaque échantillon, calculer le pourcentage

d’inhibition (% Inh) :

% Inh = [ (DOm NC − DO Echantillon) / DOm NC ] × 100

NOTE: Pour les échantillons négatifs, il est possible

d’obtenir des % Inh < 0.

Validation du test

Le test est validé si :

% Inh PC > 60% et DOm NC > 0.650

Interprétation des résultats

Table 1 Sérum individuel

Résultats

Interprétation

quantitative

Interprétation

qualitative

% Inh < 50

Négatif

50 ≤ % Inh < 80

Faible positif

% Inh ≥ 80

Fort positif

Table 2 Mélange de 2 à 20 sérums –

Protocole 1:20 - Application épidémiologique

Résultats

% Séroprévalence

Interprétation

% Inh < 65

La prévalence

positive / Ac p80

est faible, généra-

lement < à 50%

Risque de

circulation virale

nul ou faible

% Inh ≥ 65

La prévalence

positive / Ac p80

est forte, généra-

lement > à 50%

Suspicion de

passage viral. Fort

risque de présence

d’animaux IPI ou

virémiques

transitoires

Table 3 Mélange de 2 à 10 sérums –

Protocole 1:2 - Application diagnostique

Résultats

Interprétation

qualitative

Statut

% Inh < 30

Négatif

Non infecté

% Inh ≥ 30 Positif

Récemment

infecté ou infecté

Table 4 Lait individuel (bovins)

Résultats

Interprétation qualitative

% Inh < 30

Négatif

% Inh ≥ 30

Positif

Table 5 Lait de mélange (bovins)

Résultats

Interprétation

qualitative

Prévalence d’

animaux positifs (P)

% Inh < 35

Négatif

P < 10%

35 ≤ % Inh < 60

Positif +

10% ≤ P < 30%

% Inh ≥ 60

Positif ++

P ≥ 30%

Documentation et support

Service clientèle et assistance technique

Support technique : rendez-vous sur

thermofisher.com/askaquestion

Visiter thermofisher.com/support pour avoir accès

aux dernières nouveautés relatives aux services et

à l'assistance technique, notamment :

• Numéros de téléphone partout dans le monde

• Commande et Support web

• Guides de l’utilisateur, manuels et protocoles

• Certificats d’analyse

• Fiches de Données de Sécurité (FDS,

également appelées FS (Fiches Signalétiques))

Remarque: Pour les FDS relatives aux réactifs

et aux produits chimiques d'autres fabricants,

contacter chaque fabricant.

Produit à garantie limitée

Life Technologies Corporation et ses filiales

garantissent leurs produits selon les termes et

conditions générales de ventes disponibles sur le

site www.thermofisher.com/us/en/home/global/

terms-and-conditions. Si vous avez des questions,

vous pouvez prendre contact avec Life

Technologies à l'adresse web suivante :

thermofisher.com/support.

Prionics Lelystad B.V. | Platinastraat 33 |

8211 AR Lelystad | The Netherlands

Les informations contenues dans ce guide sont susceptibles d’être

modifiées sans préavis.

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PAR LA LOI, LIFE TECHNOLOGIES ET/OU SA OU SES FILIALE(S) NE

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SPÉCIAUX, ACCESSOIRES, INDIRECTS, PUNITIFS, MULTIPLES OU

CONSÉCUTIFS LIÉS AU PRÉSENT DOCUMENT OU A SON USAGE OU

EN RÉSULTANT.

Historique des révisions : Pub. N° MAN0007462 (français)

Rév.

Date

Description

B.0 27 septembre

2019

• Ajout de la déclaration concernant

l'approbation par l'Anses des

échantillons de lait pour le Programme

Francais d'Eradication BVD.

• Mise à jour des informations de licence

limitée.

A.0 15 juillet 2016

Mise à jour sur le modèle du document en

cours, avec mises à jour associées à la

garantie, aux marques et aux logos.

1.0 1 mars 2013

Base de référence pour l’historique de

révision

Informations importantes sur les licences : Ces produits peuvent

être couverts par une ou plusieurs licences à usage limité. En

utilisant ces produits, vous acceptez les conditions générales de

toutes les licences à usage limité.

les marques sont la propriété de Thermo Fisher Scientific et de ses

filiales, sauf indication contraire.

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