Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Porc. Salmonella Ab 2.0 Plate Kit Mode d'emploi

Marque: Thermo Fisher Scientific

Modèle: PrioCHECK Porc. Salmonella Ab 2.0 Plate Kit

Taper: Mode d'emploi

Réservé à l’usage vétérinaire. Usage in vitro exclusivement.

NOTICE D’UTILISATION

PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Plate Kit

Test ELISA pour la détection

in vitro

des anticorps spécifiques de

Salmonella

dans le jus de viande de porcs

Référence Catalogue

7610670 Pub. Nº MAN0018730 Rév.

B.0

AVERTISSEMENT !

Lire les fiches de données de sécurité (FDS) et suivre les consignes de manipulation. Porter des lunettes de sécurité, des

gants et des vêtements appropriés. Les fiches de données de sécurité (FDS) sont disponibles à l’adresse thermofisher.com/support.

AVERTISSEMENT ! RISQUES BIOLOGIQUES POTENTIELS.

Lire les informations de sécurité relatives aux risques biologiques du produit

disponibles sur thermofisher.com. Porter des lunettes de sécurité, des gants et des vêtements appropriés.

Introduction

La salmonellose fait partie des zoonoses majeures qui peuvent provoquer des signes cliniques graves chez l'homme. Les porcs sont une source importante

d'infections à salmonelles. En particulier, les élevages de porcs infectés constituent un problème de santé publique car ils sont une source de contamination

potentielle de la viande à l'abattoir. La surveillance et le diagnostic des élevages de porcs infectés sont faciles à réaliser en recherchant les anticorps spécifiques

de Salmonella dans le sérum des porcs ou le jus de viande. Applied Biosystems™ PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Plate Kit, mis au point à l'Institut

Vétérinaire Danois (Nielsen et al., 1995), a été utilisé avec succès dans le cadre du programme de surveillance des salmonelles dans les élevages de porcs au

Danemark. De plus, le test ELISA est souvent utilisé comme test de référence pour la mise au point d'autres tests ELISA spécifiques des salmonelles [1].

PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Plate Kit peut être employé pour détecter des infections causées chez des porcs. Il s'agit des souches de Salmonella des

sérogroupes B, C1 et D (les sérotypes plus fréquentes isolés en Europe, Asie et aux États-Unis). Le test est adapté au dépistage à grande échelle et aux

programmes de surveillance des infections à salmonelles chez les porcs [1,2].

Principe du test

PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Plate Kit est un test ELISA indirect qui détecte les anticorps spécifiques de Salmonella chez les porcs. Les anticorps

détectés sont dirigés contre les sérotypes 1, 4, 5, 6, 7 et 12 de l'antigène O, constitutif du lipopolysaccharide (LPS) de la paroi des salmonelles. Les plaques

sont revêtues de LPS purifié extrait de S. Typhimurium and S. Choleraesuis. Le conjugué est un anticorps de lapin anti-porc couplé à la peroxydase de raifort.

Les échantillons à tester sont pré-dilués dans une plaque fictive et transférés dans les puits correspondants d'une plaque de contrôle puis incubés à

température ambiante (22±3°C). Les plaques sont ensuite lavées ensuite lavée et le conjugué marqué à la peroxydase est ajouté. Après incubation à 22±3°C

et lavage des plaques, le substrat chromogène (TMB) prêt à l'emploi est distribué dans tous les puits de la plaque de test. A la fin de la période d'incubation

à 22±3°C le développement de la coloration est stoppé et la densité optique (DO) est mesurée à 450 nm.

Composition du coffret

Coffret de 50 plaques pour 4500 échantillons. Stockez le coffret à 5±3°C

jusqu'à la date d’expiration. Cf. étiquette du coffret : la date d'expiration y

figure. La durée de conservation des composants dilués, ouverts ou

reconstitués est mentionnée ci-dessous le cas échéant.

Composant

Description

1 : Plaque de test

50 plaques de test

2 : Conjugué (30x)

Concentré 30x, à diluer avant utilisation. Deux

flacons avec 12 mL de conjugué. Durée de vie du

conjugué : 24h à 22+3°C.

3 : Tampon de dilution (5x)

Concentré 5x, à diluer avant utilisation. Un flacon

contient 500 mL du tampon de dilution. Durée de vie

du tampon de dilution: 24h à 22±3°C.

4 : Solution de lavage (100x)

Concentré 100x, à diluer avant utilisation. Quatre

flacons contenant 60 mL de solution de lavage. Durée

de vie de la solution de lavage : 1 semaine à 22±3°C.

5 : Contrôle négatif

Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 1.5 mL de

contrôle négatif.

6 : Contrôle de validation

Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 1.5 mL de

contrôle de validation.

Remarque : l'utilisation de ce contrôle est

facultative.

7 : Contrôle positif

Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 1.5 mL de

contrôle positif.

8 : Substrat chromogène (TMB)

Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 500 mL et un flacon

contenant 60 mL de substrat chromogène (TMB).

9 : Solution d'arrêt

Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 500 mL et un

flacon contenant 60 mL de solution d'arrêt.

Composants

supplémentaires du lot

Notice d'utilisation

Autres matériels nécessaires

Use

Description

(1)

Plaques de pré-dilution

Plaques pour la pré-dilution des échantillons de jus de

viande. Nous conseillons l'utilisation de plaques à fond

rond (Réf. 267245). L'utilisation d'autres plaques ou de

tubes non liants est également possible.

Équipement en général

Équipement de laboratoire conforme aux

règlements de sécurité nationaux.

Analyse des résultats

Lecteur de plaques. Le lecteur doit être équipé d'un

filtre permettant de lire les plaques à 450 nm.

En option

Laveur de plaques.

(1) Sauf indication contraire, tous les produits sont disponibles sur thermofisher.com.

Procédure de test

Précautions

• Les Normes de Sécurité Nationales doivent être appliquées de façon stricte.

• PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Plate Kit doit être fait dans des

laboratoires équipés à cet effet.

• Les échantillons doivent être considérés comme potentiellement

infectieux. Tous les objets qui sont en contact avec échantillons sont à

considérer comme potentiellement contaminés.

Remarques

Il faut tenir compte des points suivants pour arriver à des résultats valables

avec le PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Plate Kit :

• Le strict respect du protocole de la procédure de test est obligatoire.

• Nous conseillons un lavage à répéter 6 fois au cas où le test serait fait

avec un système robotique.

• Tous les réactifs du lot doivent être amenés à température ambiante

(22±3°C) avant l'utilisation.

• Les embouts des pipettes doivent être changés à chaque nouvelle étape

de pipetage.

• Des récipients séparés doivent être utilisés pour chaque réactif.

• Les composants du lot ne doivent pas être utilisés après la date de

péremption ou en cas de constatation d'une altération de l'aspect.

• Les composants de lots avec des numéros différents ne doivent pas être

employés ensemble.

• Le test doit être réalisé avec de l'eau déminéralisée ou une eau de

qualité équivalente.

Solutions à préparer au préalable

Tampon de dilution

Le tampon de dilution (composant 3) concentré doit être dilué 5 fois dans

de l'eau déminéralisée ou de l'eau distillée. Pour faire un test avec une

plaque : préparer 45 mL (ajouter 9 mL de tampon de dilution (5x) à 36 mL

d’eau déminéralisée ou d’eau distillée). Stabilité du tampon de dilution :

24 heures à 22±3°C.

Dilution du conjugué

Préparer la dilution du conjugué (composant 2) dans du tampon de dilution.

Pour faire un test avec une plaque : préparer 12 mL (ajouter 0.4 mL du conjugué

concentré (30x) à 11.6 mL d’eau déminéralisée ou d’eau distillée).

Remarque : Le conjugué dilué est stable jusqu'à 24h.

2 PrioCHECK™ Porc. Salmonella Ab 2.0 Plate Kit Notice d'Utilisation

Solution de lavage

La solution de lavage (composant 4) doit être diluée (100x) dans de l'eau

déminéralisée ou de l'eau distillée.

La quantité est suffisante pour un volume final de 6 litres. Pour faire un test

avec une plaque : préparer 500 mL (ajouter 5 mL de solution de lavage

(100x) à 495 mL d'eau déminéralisée ou distillée.

Stabilité de la solution de lavage : 1 semaine en étant stockée à 22±3°C.

Pre-dilution des échantillons (3x) dans une plaque fictive

1. Distribuer 50 µL de chaque échantillon de test dans les puits appropriés

de la plaque fictive (voir Tableau 1).

Remarque : les échantillons de test peuvent être ajoutés dans un puits

(test unique) ou dans deux puits adjacents (test en double) en fonction

de vos exigences expérimentales.

2. Distribuer 100 µL de solution tampon de dilution de travail dans

chaque puits contenant un échantillon, puis mélanger le contenu des

puits.

3. Agiter la ou les plaques fictives pendant 1 minute à 700 tr/min (1/min).

Remarque : Le mélange de l'échantillon avec le tampon de dilution est

essentiel pour le test.

Incubation des échantillons de contrôle et des échantillons de

test

1. Étiquetez chaque colonne de la plaque de test (composant 1) avec un

marqueur permanent.

2. Distribuer 80 µL de solution tampon de dilution de travail dans les

puits d’échantillon de la plaque de test (voir Tableau 2).

3. Transférer 20 µL de chaque puits de la plaque fictive au puits respectif

de la plaque de test.

4. Distribuer 90 µL de solution tampon de dilution de travail dans les

puits de contrôle de la plaque de test (voir Tableau 2)

5. Verser 10 µL du contrôle négatif (composant 5) dans les puits A1 et B1.

6. Verser 10 µL du contrôle positif (composant 7) dans les puits C1 et D1.

7. (Facultatif) Verser 10 µL du contrôle de validation (composant 6) dans

les puits E1 et F1.

8. Agiter la ou les plaques pendant 1 minute à 700 tr/min (1/min).

9. Incuber la/les plaque(s) de test pour 30±3 minutes à température

ambiante (22±3°C).

Incubation avec le conjugue

1. Vider la plaque de test, puis laver la plaque 3 fois avec 300 µL de

solution de lavage diluée. Tapoter vigoureusement la plaque après le

dernier cycle de lavage.

2. Verser 100 µL de solution fonctionnelle du conjugué dans tous les puits.

3. Sceller la plaque de test avec le scellant pour plaques.

4. Incuber la/les plaque(s) de test pour 30±3 minutes à température

ambiante (22±3°C).

Incubation avec le substrat chromogène (TMB)

1. Vider la plaque de test, puis laver la plaque 3 fois avec 300 µL de

solution de lavage diluée. Tapoter vigoureusement la plaque après le

dernier cycle de lavage.

2. Verser 100 µL de substrat chromogène (TMB) (composant 8) dans tous

les puits.

3. Incuber la plaque pour 15±1 minutes à température ambiante (22±3°C).

4. Verser 100 µL de la solution d'arrêt (composant 9) dans tous les puits.

5. Mélanger le contenu des puits de la plaque.

Remarque : Commencer l'ajout de la solution d'arrêt 15 minutes après avoir

rempli le premier puits avec du substrat chromogène (TMB). Ajouter la

solution d'arrêt dans le même ordre et à la même vitesse que lors du

versement du substrat chromogène (TMB).

Lecture du test et calcul des résultats

1. Mesurer la densité optique (DO) des puits à 450 nm de préférence dans

les 15 minutes après l'arrêt de la formation de coloration.

2. Calculer la valeur DO450 moyenne du contrôle positif (puits C1 et D1)

3. Calculer la valeur DO450 moyenne du contrôle négatif (puits A1 et B1)

4. Calculer la valeur DO450 corrigée du contrôle positif, du contrôle de

validation (si utilisé) et de tous les échantillons en soustrayant la DO450

moyenne du contrôle négatif (puits A1 et B1).

5. Calculer le pourcentage de positivité (PP) de tous les contrôles et des

échantillons en appliquant la formule suivante.

La DO450 des échantillons est exprimée en pourcentage de positivité (PP) de

la DO450 du contrôle positif (PC) (puits C1 et D1) corrigée par la DO450

moyenne du contrôle négatif (NC) (puits A1 et B1).

PP = DO450 de l'échantillon - DO450 moyenne du NC

DO450 PC - DO450 moyenne du NC × 120- 16

Interprétation du résultat

Critères de validation

1. La DO450 moyenne de contrôle négatif (puits A1 et B1) doit être <0.4.

2. La DO450 du contrôle positif (non corrigé) devrait être >1.0.

3. Si le contrôle de validation était utilisé, le pourcentage de positivité du

contrôle de validation devrait être ≥ 40.

Au cas où ces critères ne seraient pas atteints, il faut rejeter les résultats de

cette plaque de test.

Remarque : Si la DO450 du contrôle positif (non corrigée) est inférieure à

1.000, la solution de substrat chromogène (TMB) était peut-être trop froide.

Il faut alors chauffer la solution à 22±3°C ou l'incuber jusqu'à 30 minutes.

Interprétation du pourcentage de positivité.

PP <40% Négatif

Absence d'anticorps spécifiques de

Salmonella dans l'échantillon testé.

PP ≥40% Positif

Présence d'anticorps spécifiques de

Salmonella dans l'échantillon testé.

Dans les programmes de contrôle des salmonelles plus avancés, le test peut

être utilisé avec un seuil différent (20% PP p. ex.). La stipulation de tels

seuils relève de la compétence des autorités/utilisateurs respectifs.

Plans de plaque recommandés

Les plans de plaque suivants permettent de transférer efficacement des

échantillons pré-dilués de la plaque fictive à la plaque de test (X — vide ;

S — échantillon ; P — contrôle positif ; N — contrôle négatif ; V — contrôle

de validation (facultatif)).

Tableau 1 Plan de plaque fictive

X or S(1)

(1) Si vous utilisez le contrôle de validation, laissez les puits E1 et F1 vides.

Tableau 2 Plan de plaque de test

V or S

Références

1. Nielsen B, Baggesen D, Bager F, Haugegaard J, Lind P (1995). Veterinary

Microbiology 47:205–218.

2. Van der Heijden HMF (2001). First International Ring Trial of ELISA’s

for Salmonella-antibody. Berl Münch Tierärztl Wschr 389–392.

thermofisher.com/support

thermofisher.com/askaquestion

thermofisher.com

26 août 2020

Service clientèle et assistance technique

Support technique : rendez-vous sur thermofisher.com/askaquestion

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nouveautés relatives aux services et à l'assistance technique, notamment :

• Numéros de téléphone partout dans le monde

• Commande et Support web

• Guides de l’utilisateur, manuels et protocoles

• Certificats d’analyse

• Fiches de Données de Sécurité (FDS, également appelées FS (Fiches

Signalétiques))

Remarque : Pour les FDS relatives aux réactifs et aux produits

chimiques d'autres fabricants, contacter chaque fabricant.

Garantie produit limitée

Life Technologies Corporation et ses filiales garantissent leurs produits

selon les termes et conditions générales de ventes disponibles sur le site

www.thermofisher.com/us/en/home/global/terms-and-conditions. Si vous

avez des questions, vous pouvez prendre contact avec Life Technologies à

l'adresse web suivante : thermofisher.com/support.

Prionics Lelystad B.V. | Platinastraat 33 | 8211 AR Lelystad | The Netherlands

Les informations contenues dans ce guide sont susceptibles d’être modifiées sans préavis.

CLAUSE DE NON-RESPONSABILITÉ : DANS LA MESURE PERMISE PAR LA LOI, LIFE TECHNOLOGIES

ET/OU SA OU SES FILIALE(S) NE SAURAIENT ÊTRE TENUES RESPONSABLES DE DOMMAGES

SPÉCIAUX, ACCESSOIRES, INDIRECTS, PUNITIFS, MULTIPLES OU CONSÉCUTIFS LIÉS AU PRÉSENT

DOCUMENT OU A SON USAGE OU EN RÉSULTANT.

Historique des révisions : Pub. Nº MAN0018730 (français)

Rév.

Date

Description

B.0 26 août 2020

• Protocole mis à jour pour rendre facultative le contrôle de validation.

• Section ajoutée pour les plans de plaque recommandés.

A.0 15 octobre

2019

• Nouveau document. Conversion effectuée du document existant

(PrioCHECK Salmonella Ab porcine 2.0 meat juice 50 plt 7610670

v1.1_f_160621.docx)

sur le modèle du document en cours, avec mises à

jour associées aux informations de licence limitée, à la garantie, aux

marques et aux logos.

• Changement du nom du kit de PrioCHECK® Salmonella Ab porcine 2.0

en PrioCHECK

™

Porc. Salmonella Ab 2.0 Plate Kit.

Informations importantes sur les licences : Ces produits peuvent être couverts par une ou plusieurs

licences à usage limité. En utilisant ces produits, vous acceptez les conditions générales de toutes

les licences à usage limité.

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