Thermo Fisher Scientific Mycobacterium paratuberculosis Test Kit Mode d'emploi

Marque: Thermo Fisher Scientific

Modèle: Mycobacterium paratuberculosis Test Kit

Taper: Mode d'emploi

Coffret de test Mycobacterium paratuberculosis pour ruminants

PARACHEK® 2

Test de diagnostic pour la détection in vitro des anticorps dirigés contre Mycobacterium avium

subsp. paratuberculosis dans le sérum de bovins, ovins, caprins et le lait de vache

Coffret de 2 plaques pour 192 tests (Réf. 63327)

Coffret de 5 plaques pour 480 tests (Réf. 63325)

Coffret de 30 plaques pour 2880 tests (réf. 63328)

Version 3.0_f

Pour diagnostic in vitro uniquement.

Usage strictement vétérinaire.

Conserver à 5±3°C

Produit No. : 63325/63327/63328

Le protocole pour les échantillons de lait a été optimisé et vali-

dé par Antel BioSystem Inc.

Introduction

La maladie de Johne (paratuberculose) est une enté-

rite chronique et invalidante des ruminants causée par

l’infection de Mycobacterium paratuberculosis.

Durant la phase active de l’infection et avant le début

de la maladie clinique, les animaux développent en

général des anticorps contre l’antigène M. Paratuber-

culosis. Des animaux non-infectés ne présentent pas

d’anticorps spécifiques dirigés contre M. Paratubercu-

losis mais peuvent présenter des anticorps de réaction

croisée envers d'autres mycobactéries. Ces anticorps

de réaction croisée peuvent être éliminés grâce à l'ab-

sorption du sérum avec M. phlei avant le début de

l’EIE (Essai immuno-enzymatique)1.

Le PARACHEK® 2 est basé sur l’essai immuno-

enzymatique d’origine pour la détection de la maladie

de Johne et montre le même niveau élevé de perfor-

mance. Il détecte les anticorps dirigés contre M. para-

tuberculosis dans le sérum et le lait et peut être utilisé

comme test spécifique pour le dépistage de la maladie

de Johne chez les ruminants.

Le test d’origine PARACHEK® 2 a été évalué sur des

animaux dans des régions d’Australie2 et des États

Unis3 présentant la maladie endémique de Johne et

dans d’autres régions exemptes de maladie de Johne.

La spécificité du test atteignait 99% voire plus chez les

bovins, les ovins et les caprins. Cependant l’EIE dé-

tectait plus de 80% des animaux avant le début de la

maladie clinique et 60-65% des excréteurs fécaux2

étaient positifs à l’EIE au moment ou avant la première

détection clinique de M. paratuberculosis. Pour les

ovins, la sensibilité du test était estimée à 38-44%4 et

pour les caprins, la sensibilité se situait vers 65-88%5.

Le test devrait permettre des études épidémiologiques

et être un outil utile dans la gestion et le contrôle de la

maladie de Johne chez les bovins, caprins et ovins.

Principe du test

Le test s’effectue en 4 étapes :

Étape 1

Les échantillons de sérum / lait sont dilués et incubés

dans le tampon de dilution vert contenant M. phlei afin

d’éliminer les réactions croisées des anticorps.

Étape 2

Les échantillons de sérum / lait dilués réagissent avec

les antigènes M. paratuberculosis fixés sur un support

solide. Les anticorps n’ayant pas réagi sont éliminés

par lavage après un temps approprié d’incubation.

Étape 3

Le conjugué (anti- Ig ruminants marqué avec HRPO)

réagit avec les immunoglobulines liées à l’antigène de

la phase solide. Le conjugué n’ayant pas réagi est

éliminé par lavage après un temps approprié

d’incubation.

Étape 4

Le substrat-chromogène est ajouté. Le taux de con-

version du substrat est proportionnel à la quantité

d’immunoglobuline liée. La réaction est arrêtée et

l’intensité de la coloration est mesurée par spectropho-

tométrie.

Composition du coffret

Conserver le coffret à 5±3°C jusqu’à la date de pé-

remption qui figure sur l'étiquette. La durée de conser-

vation des produits du coffret, une fois dilués, ouverts

ou reconstitués, est mentionnée au chapitre s’y réfé-

rant (voir ci-dessous « Préparation des réactifs »).

Composant 1

Microplaques tapissée de M. paratuberculosis

63327: 2 microplaques de 96 puits avec couvercles

63325: 5 micro plaques de 96 puits avec couvercles

63328: 30 microplaques de 96 puits avec couvercles

Prêt à l’emploi.

Composant 2

Sérum de contrôle positif

63327: 1 x 0,75 ml

63325: 1 x 1,0 ml

63328: 1 x 2,0 ml

Contient 0,01% de Thimérosal.

Prêt à l’emploi.

Composant 3

Sérum de contrôle négatif

63327: 1 x 0,75 ml

63325: 1 x 1,0 ml

63328: 1 x 2,0 ml

Contient 0,01% de Thimérosal.

Prêt à l’emploi.

Composant 4

Diluant vert : Tampon diluant pour échantillon

63327: 1 x 100 ml

63325: 1 x 250 ml

63328: 3 x 500 ml

Contient 0,01% de Thimérosal.

Prêt à l’emploi.

Composant 5

Tampon de lavage – concentré 20x

63327: 1 x 100 ml

63325: 1 x 250 ml

63328: 2 x 500 ml

Contient 0,01% de Thimérosal.

Diluer avec de l’eau déminéralisée ou de qualité équi-

valente (osmosée).

Composant 6

Conjugué – concentré 100x (anti-Ig ruminants mar-

qué avec HRPO)

63327: 1 x 0,5 ml

63325: 1 x 0,75 ml

63328: 2 x 2,0 ml

Contient 0,01% de Thimérosal.

À diluer avec du diluant pour conjugué (bleu).

Composant 7

Diluant bleu : Tampon diluant de conjugué

63327 : 1 x 30 ml

63325 : 1 x 75 ml

63328 : 2 x 200 ml

Contient 0,01% de Thimérosal.

Prêt à l’emploi.

Composant 8

Substrat

63327: 1 x 30 ml

63325: 1 x 75 ml

63328: 2 x 200 ml

Contient des solvants organiques.

Prêt à l’emploi.

Composant 9

Solution d’arrêt (0,5M H2SO4)

63327: 1 x 15 ml

63325: 1 x 50 ml

63328: 1 x 200 ml

Prêt à l’emploi.

Autres composants du coffret :

- Notice d'utilisation

- Chaque plaque est emballée avec son couvercle

- Fiche de contrôle qualité du lot

Équipement nécessaire (non fourni)

Équipement de laboratoire utilisé et contrôlé confor-

mément à la norme NF U 47-019 « Guide des bon-

nes pratiques pour la mise en œuvre des techni-

ques ELISA ».

Équipement général :

 Eau déminéralisée ou eau de qualité équivalente

 Microplaques non-sensibilisée, utilisées pour la di-

lution de l'échantillon (par ex. microplaque 96 puits

à fond arrondi transparent) ou équivalent, à titre in-

dicatif

 Micropipettes monocanal et multicanaux adaptées

pour pipeter les volumes requis

 Embouts de micropipette (conformes aux recom-

mandations du fabricant)

 Réservoirs pour les solutions

 Verrerie diverse adaptée

 Feuilles adhésives pour microplaques

 Vortex

Prise de l'échantillon :

Tubes dédiés au prélèvement sanguin.

Analyse des résultats :

Lecteur de microplaque

Le lecteur doit être équipé d'un filtre permettant de lire

les microplaques à 450 nm. (Référence optionnelle à

620/650 nm).

Équipement optionnel :

Laveur de microplaques

Agitateur de microplaques

Mode opératoire

Remarques :

Les recommandations nationales pour la manipulation

d'échantillons animaux doivent être suivies de façon

stricte. Le test PARACHECK® 2 ne doit être réalisé

que dans des laboratoires équipés à cet effet, confor-

mément à la norme NF EN ISO/CEI 17025 « Exigen-

ces générales concernant la compétence des labo-

ratoires d’étalonnages et d’essais ».

Les échantillons doivent être considérés comme po-

tentiellement infectieux et tout élément en contact

avec ces échantillons comme potentiellement conta-

miné.

Les données sur les risques chimiques sont indiquées

en Annexe IV.

Pour obtenir des résultats optimums avec PARA-

CHECK® 2, certaines précautions techniques indi-

quées doivent être respectées. (Voir annexe I)

Notice d’utilisation

PARACHEK

PRÉPARATION DES RÉACTIFS

Ramener tous les réactifs à température ambiante

(22±3°C) à l’exception du conjugué concentré

100x.

1. Microplaques tapissées de M. paratuberculosis

Ramener les plaques à température ambiante pen-

dant au moins 30 min avant d’ouvrir le sachet en

plastique. Enlever les barrettes non-utilisées du ca-

dre et refermer le sachet en plastique contenant

son dessicant. Les cadres et couvercles sont réuti-

lisables.

2. Contrôles positifs et négatifs

Ramener à température ambiante et mélanger soi-

gneusement chaque contrôle (Prêts à l’emploi).

3. Diluant vert

Tampon diluant pour échantillon. Ramener à tem-

pérature ambiante et mélanger soigneusement

(Prêt à l’emploi).

NOTE : Il faut jusqu’à 2 h. pour que toute la bou-

teille de diluant vert soit ramenée à température

ambiante. Si vous souhaitez ramener à tempéra-

ture ambiante plus rapidement, veuillez utiliser un

bain-marie réglé à cette température.

4. Diluant bleu

Tampon diluant pour conjugué. Ramener à tempé-

rature ambiante et mélanger soigneusement (Prêt à

l’emploi).

5. Préparation du conjugué

Préparer la solution de travail du conjugué en mé-

langeant 1 volume de conjugué (concentré 100x)

avec 99 volumes de diluant pour conjugué (Voir

annexe II).

NOTE : La solution du réactif conjugué doit être

préparée extemporanément avant chaque série

d’analyses.

Elle peut être conservée jusqu’à 8 heures à tempé-

rature ambiante (22±3°C).

6. Tampon de lavage – concentré 20x

Préparer la solution de travail du tampon de lavage

en mélangeant 1 volume de solution de lavage

(concentrée 20x) avec 19 volumes d'eau déminéra-

lisée ou de qualité équivalente (Voir annexe II).

Remarque : si la solution de lavage (20x) fait appa-

raître la présence d'un précipité, chauffer le flacon

dans un bain-marie à 30°C jusqu'à dissolution

complète du précipité.

NOTE : La stabilité de la solution de lavage diluée

est de 2 semaines à 22±3°C.

7. Solution Substrat chromogène

Ramener la solution à température ambiante

(22±3°C) au moins 30 min avant utilisation.

NOTE : La solution substrat doit être claire et inco-

lore. L’éliminer si une coloration bleue ou une forme

de précipitation apparaît. Verser la quantité néces-

saire dans un récipient. Ne pas prélever à la pipette

directement dans le flacon et ne pas reverser la so-

lution non-utilisée dans le flacon.

PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS

Les échantillons de sérum ou de lait peuvent être ob-

tenus en utilisant les méthodes de prélèvement stan-

dards conformément à la norme NF U 47-020 « Con-

ditions d’acceptabilité des échantillons pour ana-

lyses ELISA ».

 Les sérums sont prélevés en utilisant les méthodes

classiques.

 Si les analyses sont effectuées sur du lait, le proto-

cole est optimisé pour des échantillons de lait entier

frais, congelé ou avec conservateur. Ne pas utiliser

de colostrum ni de lait de moins d’une semaine de

vêlage.

Dilution des échantillons de sérum et de lait :

Une dilution au 1:2 est appliquée uniquement pour les

échantillons de lait, la dilution d’échantillons de sérum

et des contrôles restant au 1:20.

Utiliser une plaque non-sensibilisée pour la dilution

des échantillons et des contrôles à raison de 1 puits

par échantillon et 2 puits pour chacun des contrôles

(Voir annexe III).

1.1 Diluer les contrôles positif et négatif et les

échantillons de sérum au 1:20 dans le diluant

vert, à raison par ex. de 15 µl de sérum testé ou

de contrôle dans 285 µl de diluant vert ; des vo-

lumes inférieurs à 10 µl devant être évités (aug-

mentation des incertitudes).

1.2 Si des échantillons de lait sont testés, diluer le

lait au 1:2 dans le diluant vert, à raison par ex.

150 µl de lait dans 150 µl de diluant vert.

1.3 Couvrir la microplaque de dilution à l’aide d’un

couvercle (ou d’une feuille adhésive) et l’agiter à

vitesse modérée (~300 rpm) pendant au moins 1

min. à l'aide d'un agitateur de microplaques.

1.4 Laisser incuber à température ambiante

(22±3°C) entre 1 min. et 24 h. (possibilité

d’incubation pendant la nuit)

1.5 Transférer 100 µl des échantillons et des contrô-

les dilués dans les puits correspondants de la

microplaque sensibilisée. Couvrir à l’aide d’un

couvercle (ou d’une feuille adhésive) et agiter

légèrement la microplaque (voir annexe I-3)

INCUBATION DES ÉCHANTILLONS

2.1 Incuber les échantillons sur la microplaque pen-

dant 30±3 min. à température ambiante

(22±3°C).

2.2 Laver la microplaque 3 fois avec 300 µl de solu-

tion de travail du tampon de lavage par puits à

l’aide d’un laveur de microplaque avec un pro-

gramme de lavage adapté.

Remarque : En cas de lavage manuel, prendre

garde aux contaminations croisées entre puits

adjacents. Après le dernier lavage, tapoter plu-

sieurs fois la plaque retournée face vers le bas

sur du papier absorbant non-pelucheux afin de

retirer autant que possible tout résidu de liquide

de lavage restant à l’intérieur des puits (voir an-

nexe I)

INCUBATION DU CONJUGUÉ

3.1. Déposer 100 µl de conjugué dilué dans chacun

des puits de la microplaque. Couvrir à l’aide d’un

couvercle (ou d’une feuille adhésive) et agiter

légèrement la microplaque (5-10 sec. à ~300

rpm).

3.2 Incuber la microplaque pendant 30±3 min à

température ambiante (22±3°C).

3.3 Laver la microplaque 3 fois avec 300 µl de solu-

tion de travail du tampon de lavage par puits

comme au point 2.2.

Remarque : Faire attention à bien enlever tous

résidus de solution de lavage, ceux-ci pouvant

perturber la réaction du substrat lors de l’étape

de révélation !

RÉVÉLATION

Réaction du substrat

4.1 Distribuer 100 µl de substrat chromogène (TMB)

dans chacun des puits de la microplaque et agi-

ter légèrement la microplaque (5-10 sec. à ~300

rpm).

4.2 Incuber la microplaque 15 à 20 min. à tempéra-

ture ambiante (22±3°C).

Remarque : Protéger des rayons directs du soleil

4.3 Déposer 50 µl de solution d'arrêt dans chacun

des puits de la microplaque.

Remarque : La solution d’arrêt doit être ajoutée

dans les puits dans le même ordre et à la même

vitesse que la solution substrat. La couleur des

contrôles positifs doit virer du bleu au jaune.

LECTURE ET CALCUL DES RÉSULTATS

5.1 Agiter (à~300 rpm) la microplaque un court ins-

tant (5-10 secondes).

5.2 Mesurer la densité optique (DO) des puits à

l’aide d’un lecteur de microplaques à 450 nm

dans les 30 min. qui suivent.

(Recommandation : utiliser un filtre de référence

à 620/650 nm).

5.3 Calculer la valeur DO450nm moyenne des puits at-

tribués au contrôle positif

(CP = DO450nm moyenne des contrôles positifs).

5.4 Calculer la valeur DO450nm moyenne des puits at-

tribués au contrôle négatif

(CN = DO450nm moyenne des contrôles négatifs).

5.5 Le pourcentage de positivité (E/P) des échantil-

lons est calculé selon la formule ci-après.

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

Critères de validation

6.1 La DO450 moyenne des contrôles positifs (CP)

doit être ≥ 0,500.

6.2 La DO450 moyenne des contrôles positifs (CP)

doit être 5 fois supérieure à celle des contrôles

négatifs (CN) :

(OD450nm CP / OD450nm CN) ≥ 5

Si ces critères ne sont pas validés, les résultats sont

ininterprétables et la microplaque devra être testée à

nouveau.

Interprétation du pourcentage E/P

- Pour les échantillons de sérums

• Si les résultats obtenus sont supérieurs ou

égaux au seuil de 15% de positivité (E/P ≥

15%), le test est considéré positif.

• Si les résultats obtenus sont inférieurs au

seuil de 15 % de positivité (E/P < 15%), le

test est considéré négatif.

- Pour les échantillons de lait

• Si les résultats obtenus sont supérieurs ou

égaux au seuil de 10% de positivité (E/P ≥

10%), le test est considéré positif.

• Si les résultats obtenus sont inférieurs au

seuil de 10 % de positivité (E/P < 10%), le

test est considéré négatif.

NOTE : Un résultat est dit positif si la valeur

d’absorbance de l’échantillon est supérieure à la va-

leur seuil. Un résultat positif indique la présence

d’anticorps spécifiques de M. paratuberculosis dans

l'échantillon, que l’animal est probablement infecté par

M. paratuberculosis et que d’autres animaux sont po-

tentiellement infectés dans le troupeau.

Un résultat est dit négatif si la valeur d’absorbance de

l’échantillon est inférieure à la valeur seuil. Un résultat

négatif indique l’absence d’anticorps spécifiques de M.

paratuberculosis dans l'échantillon. Un résultat négatif

obtenu sur un seul animal ne peut être interprété que

si l’historique de paratuberculose et les résultats de

tests sur le troupeau entier sont connus. Même si les

animaux sont généralement infectés en période néo-

natale, une réponse immune ne se développe pas

immédiatement. Selon les informations actuelles, la

séroconversion a généralement lieu avant que les si-

gnes cliniques n’apparaissent.

Comme tout test biologique, le présent test peut don-

ner occasionnellement un résultat positif ou négatif er-

ronés selon les circonstances locales. Un test doit être

interprété dans son contexte en fonction de toutes les

informations cliniques, historiques et épidémiologiques

disponibles et pertinentes de l’animal ou des animaux

faisant l’objet du test. Un autre test de confirmation

peut être nécessaire dans certaines circonstances.

La responsabilité de l’interprétation du test ainsi que

les décisions relatives à l’élevage restent à la seule

décision de l’utilisateur, du vétérinaire consulté, du

conseiller sur la santé de l’animal ou autres autorités.

Prionics AG ne saurait être tenu pour responsable en

cas de perte ou de dommage, quel qu’il soit, provoqué

ou provenant de l’interprétation des résultats du test.

Annexe I

Veuillez suivre les instructions mentionnées dans le

coffret PARACHEK® 2 (ELISA de maladie de Johne)

aussi strictement que possible étant donné que tout

écart peut réduire la performance du test et conduire à

des résultats erronés.

100/

450450

450450 ∗

⎥

⎦

⎤

⎢

⎣

⎡

−

=CNODCPOD CNODnÉchantilloOD

nmnm

PARACHEK

1. Un mélange par vortex du conjugué dans le diluant

bleu peut réduire la performance du coffret si celui-

ci est effectué avec trop de vigueur. Le mélange

par vortex doit être effectué à une vitesse modérée,

en sélectionnant « arrêt – départ » 3 ou 4 fois afin

d’éviter ou de minimiser l’apparition de mousse au

niveau du diluant. Cette démarche devrait être sui-

vie à chaque fois qu’une opération de mélange par

vortex doit être appliquée sur des réactifs biologi-

ques.

Cependant, un mélange insuffisant peut également

s’avérer problématique.

Remarque : Il est impossible de « trop » mélanger

pour autant que cette action soit réalisée en dou-

ceur. Pour des résultats précis et reproductibles,

vérifier toujours que le conjugué a été mélangé de

façon homogène.

2. Éviter de placer les microplaques sensibilisées

(avec ou sans couvercle) directement sur la surface

de travail. Le froid du revêtement solide pourrait

conduire à une baisse de la température et produire

un phénomène couramment appelé “effet de

bords”.

3. Les instructions du coffret spécifient que lorsque les

réactifs sont ajoutés dans la microplaque, celle-ci

doit ensuite être mélangée en agitant. Le non-

respect de cette instruction peut diminuer la repro-

ductibilité de l’essai et conduire à des résultats er-

ronés. Après ajout de chaque réactif, la micropla-

que doit être placée dans un agitateur de plaque et

agitée comme indiqué. La microplaque doit égale-

ment être mélangée de cette même façon avant

toute lecture optique.

4. L’utilisation d’une pissette en plastique au moment

de l’application du tampon de lavage dans les pla-

ques à la place d’un laveur d’EIE, peut laisser une

trop grande quantité de tampon de lavage dans les

puits après le nettoyage et ainsi provoquer un

nombre important de bulles. Une trop grande quan-

tité de résidus de tampon de lavage peut affecter la

performance de la solution enzyme substrat. Ceci

pourrait conduire à une réduction significative de la

quantité de coloration développée par l’EIE pouvant

induire des valeurs inférieures et ainsi rendre les

résultats invalides.

Nous recommandons donc la méthodologie

Laver les plaques comme expliqué dans les instruc-

tions du coffret. En fin de phase de lavage, tapoter

ou aspirer le contenu des puits. Évacuer le contenu

des puits en agitant fermement plusieurs fois jus-

qu’à ce que le tampon de lavage soit complètement

enlevé. Il ne doit plus y avoir de résidus du tampon

de lavage ni de bulles visibles dans les puits. Es-

suyer doucement dessus et dessous la plaque et

ajouter le conjugué ou le substrat. Placer la plaque

sur un agitateur pendant environ 1 min. pour bien

mélanger le contenu des puits.

5. Le papier absorbant tout comme les serviettes en

papier ne sont pas adaptés au séchage par touche

des plaques. Le papier libère des peluches qui

peuvent adhérer aux surfaces humides des puits et

provoquer un changement de couleur du substrat.

Utiliser un papier absorbant sans peluche ou un

matériau similaire pour essuyer les plaques.

6. La remise à zéro des lecteurs d'EIE peut être pro-

blématique. Il s'avère que différents lecteurs remet-

tent différemment à zéro les résultats au niveau de

lectures d'absorbance du contrôle négatif. Tous les

lecteurs doivent être remis à zéro en utilisant une

nouvelle plaque ou bande non utilisée.

Annexe II

Préparation des solutions de travail du tampon de

lavage et du conjugué

Solution de travail du tampon de lavage :

Mélanger les volumes indiqués d'eau déminéralisée

ou de qualité équivalente (osmosée) et de liquide de

lavage 20x (Composant 5).

Pour préparer 1 litre de solution de travail de lavage:

• Transférer 50 ml de solution de lavage (20x) dans

un flacon de 1 l.

• Ajouter 950 ml d'eau déminéralisée ou de qualité

équivalente (osmosée) et mélanger jusqu'à obten-

tion d'une solution claire (env. 30 min).

Pour d'autres volumes de solution de travail du tam-

pon de lavage, veuillez vous référer au tableau ci-

dessous.

Volume de solution

de liquide de lavage

Quantité de

liquide de lavage

Quantité d'eau

déminéralisée

0.3 l = 15 ml + 285 ml

0.5 l = 25 ml + 475 ml

1.0 l = 50 ml + 950 ml

2.0 l = 100 ml + 1900 ml

Solution de travail du conjugué :

Mélanger les volumes indiqués de conjugué 100x

(Composant 6) avec la quantité appropriée de diluant

pour conjugué (Composant 7) afin d'obtenir la quantité

désirée de conjugué.

Nb de

plaques

Conjugué

nécessaire

Conjugué

(100x)

Diluant

pour conjugué

1 12 ml = 0.12 ml + 11.88 ml

2 24 ml = 0.24 ml + 23.76 ml

3 36 ml = 0.36 ml + 35.64 ml

4 48 ml = 0.48 ml + 47.52 ml

5 60 ml = 0.60 ml + 59.40 ml

Annexe III

Schéma de plaque donné à titre indicatif :

Les contrôles positif et négatif doivent être testés en

double. De façon à compenser les temps de distribu-

tion d’une série, il est conseillé de placer chaque con-

trôle positif et négatif au début et à la fin de chaque

série d’échantillons et de placer le contrôle interne (CI)

au milieu de la série.

123456789101112

ACN E 7 E 15 E 23 E 31 E 39 E 46 E 54 E 62 E 70 E 78 E 86

BCP E 8 E 16 E 24 E 32 E 40 E 47 E 55 E 63 E 71 E 79 E 87

CE 1 E 9 E 17 E 25 E 33 E 41 E 48 E 56 E 64 E 72 E 80 E 88

DE 2 E 10 E 18 E 26 E 34 E 42 E 49 E 57 E 65 E 73 E 81 E 89

EE 3 E 11 E 19 E 27 E 35 E 43 E 50 E 58 E 66 E 74 E 82 E 90

FE 4 E 12 E 20 E 28 E 36 E 44 E 51 E 59 E 67 E 75 E 83 E 91

GE 5 E 13 E 21 E 29 E 37 E 45 E 52 E 60 E 68 E 76 E 84 CN

HE 6 E 14 E 22 E 30 E 38 CI E 53 E 61 E 69 E 77 E 85 CP

Annexe IV

Réglementation de Sécurité : Consignes de Ris-

ques et de Sécurité

Les Normes de Sécurité Nationales doivent être

appliquées de façon stricte.

Composant 1

Microplaques tapissées de M. paratuberculosis