Thermo Fisher Scientific VetMAX Ear Notch Fast Lysis Kit Mode d'emploi

Marque
Thermo Fisher Scientific
Modèle
VetMAX Ear Notch Fast Lysis Kit
Taper
Mode d'emploi
VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit
Pour la préparation d'acides nucléiques par lyse rapide en vue d’une PCR
Référence catalogue FLK
Pub. nº MAN0009583 Rév. D.0
AVERTISSEMENT ! Lire les ches de données de sécurité (FDS) et suivre les consignes de manipulation. Porter des lunettes
de protection, des gants et des vêtements appropriés. Les ches de données de sécurité (FDS) sont disponibles à l’adresse
thermofisher.com/support.
Description du produit
Le Applied Biosystems™ VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit fait appel à une étape de lyse rapide sans étape de purication, pour extraire
des acides nucléiques en vue d'une PCR temps réel.
Pour obtenir des instructions détaillées sur l’utilisation du VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit avec des kits compatibles de PCR temps réel
VetMAX™, contactez l’assistance technique.
Contenu et conservation
Tableau 1 VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit (n° cat. FLK, 200 réactions)
Contenu Quantité
Conservation
À réception Après la première
utilisation
6a ; Fast Lysis Concentrate (30X) (tube orange) 4 × 500 µl –30°C à –10°C –30°C à –10°C
6b ; Fast Lysis Diluent Buffer (flacon blanc) 2 × 30 ml 2°C à 8°C
Matériels requis non fournis
Sauf indication contraire, tous les produits sont disponibles sur thermofisher.com. PFL : Fisher Scientic (fisherscientific.com) ou l’un
des principaux fournisseurs de matériel de laboratoire.
Article Source
Agitateur de laboratoire, vortex ou équivalent PFL
Incubateur ou bloc chauffant réglé sur 95°C[1] PFL
Deux incubateurs ou blocs chauffants réglés sur 70°C et 90°C[2] PFL
Micropipettes réglables (de 1 à 1 000 µl) avec pointes à filtre exemptes de DNase/RNase PFL
Microtubes (compatibles avec l’incubateur ou le bloc chauffant utilisé) PFL
Eau nuclease-free (non traitée au DEPC) AM9938
[1] Requis pour la méthode de chauffage en une étape.
[2] Requis pour la méthode de chauffage en deux étapes.
NOTICE D’UTILISATION
Pour usage en laboratoire.
Instructions
Instructions pour le prélèvement d’échantillons
Type d’échantillon Procédure
Biopsie auriculaire Ajouter directement la Fast Lysis Solution (FLS) sur le tissu dans le tube
de prélèvement.
Contrôle positif externe (EPC) (fourni dans les kits de PCR temps réel
VetMAX™)Pour connaître les volumes de prélèvement, se référer à la notice
d’utilisation du kit VetMAX™.
Options de lyse de l’échantillon
Deux types de méthodes sont disponibles pour la lyse rapide d’échantillons de biopsies auriculaires avec VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis
Kit.
•Méthode de chauffage en une étape : nécessite une étape de chauffage à 95°C pendant 10 minutes.
•Méthode de chauffage en deux étapes : nécessite deux étapes de chauffage : 70°C pendant 30 minutes et 90°C pendant
10 minutes.
Préparer la solution de lyse "Fast Lysis Solution" (FLS)
1. Mélanger les composants suivants pour le nombre requis d’échantillons plus 10 % d’excédent.
Utiliser la solution de lyse FLS le jour où elle a été préparée.
Composant Volume pour 1 échantillon Volume pour N échantillons
6a ; Fast Lysis Concentrate (30X) 10 µl N × 10 µl
6b ; Fast Lysis Diluent Buffer 290 µl N × 290 µl
FLS totale 300 µl N × 300 µl
2. Procéder avec la méthode adaptée à votre laboratoire.
•Méthode de chauffage en une étape—Consulter “Lyser les échantillons avec la méthode de chauffage en une étape” en
page 2.
•Méthode de chauffage en deux étapes—Consulter “Lyser les échantillons avec la méthode de chauffage en deux étapes” en
page 3.
Lyser les échantillons avec la méthode de chauffage en une étape
1. Préchauffer un bloc chauffant ou un incubateur à 95°C.
2. Associer la solution de lyse FLS à chaque échantillon ou contrôle, comme indiqué dans le tableau suivant.
Remarque : Vérier que la totalité de la biopsie auriculaire est en contact avec la solution de lyse FLS.
Type d’échantillon Échantillon testé FLS
Prélèvement ou EPC Se référer à “Instructions pour le prélèvement d’échantillons” en
page 2 300 µl
Échantillon de contrôle négatif (NCS) — 300 µl
3. (Facultatif) Vortexer immédiatement chaque échantillon pendant 15 secondes.
Il est également possible d’immerger chaque biopsie auriculaire dans la solution de lyse FLS, puis de pipetter la solution sur
l’échantillon.
4. Incuber les échantillons à 95°C pendant 10 minutes.
5. Refroidir les lysats en les plaçant à −20°C ou entre 2 et 8°C pendant 10 minutes pour éviter toute contamination croisée lors de la
RT-PCR temps réel.
6. (Facultatif) Centrifuger les lysats à 4 000 × g pendant 1 minute.
2VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit Notice d’utilisation
Le lysat est prêt pour une PCR temps réel avec un kit VetMAX™ compatible.
• Conserver le lysat sur de la glace ou à une température comprise entre 2 et 8°C pendant une durée maximale de 6 heures, ou en
dessous de –16°C pour un stockage à long terme.
• Réaliser une PCR temps réel avec 5 µl de lysat.
Lyser les échantillons avec la méthode de chauffage en deux étapes
1. Préchauffer deux blocs chauffants ou incubateurs à 70°C et 90°C.
2. Associer la solution de lyse FLS à chaque échantillon ou contrôle, comme indiqué dans le tableau suivant.
Remarque : Vérier que la totalité de la biopsie auriculaire est en contact avec la solution de lyse FLS.
Type d’échantillon Échantillon testé FLS
Prélèvement ou EPC Se référer à “Instructions pour le prélèvement d’échantillons” en
page 2 300 µl
Échantillon de contrôle négatif (NCS) — 300 µl
3. (Facultatif) Vortexer immédiatement chaque échantillon pendant 15 secondes.
Il est également possible d’immerger chaque biopsie auriculaire dans la solution de lyse FLS, puis de pipetter la solution sur
l’échantillon.
4. Incuber les échantillons à 70°C pendant 30 minutes.
IMPORTANT ! Il est essentiel que les échantillons atteignent 70°C le plus rapidement possible. Si un incubateur est utilisé,
s’assurer que les tubes soient correctement espacés pour permettre une circulation sufsante de l’air.
5. Transférer rapidement les échantillons dans un incubateur ou un bloc chauffant préchauffé à 90°C, puis incuber pendant 10 minutes.
Ne pas laisser refroidir les tubes au cours du transfert.
6. Réaliser l’une des procédures suivantes pour éviter toute contamination croisée lors de la RT-PCR temps réel.
• Refroidir les lysats en les plaçant entre 2 et 8°C pendant 5 minutes.
• Centrifuger les lysats à 4 000 × g pendant 1 minute.
Le lysat est prêt pour une PCR temps réel avec un kit VetMAX™ compatible.
• Conserver le lysat sur de la glace ou à une température comprise entre 2 et 8°C pour une utilisation immédiate. Conserver en
dessous de –16°C pendant 6 mois au maximum.
• Réaliser une PCR temps réel avec 5 µl de lysat.
Garantie limitée du produit
Life Technologies Corporation et ses liales garantissent leurs produits selon les termes et conditions générales de ventes disponibles sur
le site www.thermofisher.com/us/en/home/global/terms-and-conditions.html. Si vous avez des questions, vous pouvez prendre
contact avec Life Technologies à l’adresse web suivante : www.thermofisher.com/support.
VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit Notice d’utilisation 3
Laboratoire Service International (LSI) | 6 Allée des Ecureuils – Parc Tertiaire du Bois-Dieu | 69380 Lissieu – France
Pour les descriptions des symboles sur les étiquettes et les documents du produit, consulter thermofisher.com/symbols-definition.
Les informations contenues dans ce guide sont susceptibles d’être modifiées sans préavis.
CLAUSE DE NON-RESPONSABILITÉ: DANS LA MESURE PERMISE PAR LA LOI, THERMO FISHER SCIENTIFIC INC. ET/OU SA OU SES FILIALE(S) NE SAURAIENT ÊTRE TENUES
RESPONSABLES DE DOMMAGES SPÉCIAUX, ACCESSOIRES, INDIRECTS, PUNITIFS, MULTIPLES OU CONSÉCUTIFS LIÉS AU PRÉSENT DOCUMENT OU A SON USAGE OU EN
RÉSULTANT.
Traduit de l’anglais, publication numéro MAN0009603 Rév. C.0.
Historique des révisions: Pub. nº MAN0009603
Révision Date Description
C.0 17 mars 2020 Ajout de la méthode de chauffage en une étape, qui ne requiert qu’une seule étape de chauffage.
B.0 2 octobre 2019
•Modification du nom du produit de MagMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit à VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit.
• Mise à jour des informations sur la licence limitée.
A.0 8 mars 2017 Mise à jour du modèle de document actuel, avec les mises à jour associées à la garantie, aux marques commerciales et aux
logos.
1.0 11 octobre 2013 Référence pour l’historique des révisions.
Informations importantes sur les licences : Ces produits peuvent être couverts par une ou plusieurs licences à usage limité. En utilisant ces produits, vous acceptez les conditions
générales de toutes les licences à usage limité.
©2020 Thermo Fisher Scientic Inc. Tous droits réservés. Toutes les marques sont la propriété de Thermo Fisher Scientific et de ses filiales, sauf indication contraire.
thermofisher.com/support | thermofisher.com/askaquestion
thermofisher.com
19 Mars 2020
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Thermo Fisher Scientific VetMAX Ear Notch Fast Lysis Kit Mode d'emploi

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