(Facultatif) Conserver la solution Lysis/Binding/IPC à température ambiante pendant 24 heures maximum.
Préparation de l’échantillon
Préparer les échantillons selon le type d’échantillon.
Pour... Faire...
• Sérum
• Sang total
• Surnageant de culture cellulaire
Procéder avec 200 µl d’échantillon.
Semences 1. Ajouter 500 µl de semences dans un tube propre.
2. Centrifuger à 15 000 × g pendant 2 minutes.
3. Procéder avec 200 µl de surnageant.
Tissu 1. Ajouter les composants suivants dans un tube de 2 ml :
• tissu : 20 à 30 mg
• PBS (1X), pH 7.4 : 1 ml
• PYREX™ Solid Glass Beads for Distillation Columns (3 mm) : 2 billes
2. Broyer (les agiter avec les billes) les échantillons.
• Fisher Scientific™ Bead Mill 24 Homogenizer : 6 m/s pendant 45 secondes
• Mixer Mill 400 : 30 Hz pendant 5 minutes
Remarque : Si un autre broyeur à billes est utilisé, voir “(Optionnel) Déterminer les paramètres optimaux
du broyeur à billes” en page 5.
3. Centrifuger à 1 000 x g pendant 1 minute.
4. Procéder avec 100 µl de surnageant.
Mélange de l’échantillon avec le mélange Bead/PK et la solution Lysis/Binding/IPC
1. Retourner plusieurs fois le tube de mélange Bead/PK pour resuspendre les billes, puis ajouter 30 µl de mélange Bead/PK dans les
puits requis de la plaque ou de la barrette de tubes.
2. Transférer le volume adéquat de chaque échantillon préparé dans un puits contenant le mélange Bead/PK.
Pour... Composer...
Sérum, sang total ou surnageant de culture cellulaire 200 µl d’échantillon
Semences 200 µl de surnageant
Tissu 100 µl de surnageant
3. Mélanger l’échantillon avec le mélange Bead/PK pendant 2 minutes à température ambiante selon la méthode de votre choix.
•Utilisation d’un agitateur de plaques : agiter vigoureusement pendant 2 minutes (voir “Déterminer le réglage maximal de
l’agitateur de plaques” en page 5).
•Par pipetage : homogénéiser par plusieurs aspiration-refoulement, puis incuber 2 minutes à température ambiante. (Pour un
traitement en aval sur le KingFisher™ mL Magnetic Particle Processor, mélanger par pipetage.)
4. Ajouter 700 µl de solution Lysis/Binding/IPC dans chaque puits ou tube contenant un échantillon.
5. Procéder immédiatement au placement des échantillons dans l’instrument (section suivante).
Placement des échantillons dans l’instrument
1. Sélectionner le script approprié sur l’instrument (voir “Téléchargement et installation du script” en page 6).
2. Lancer la série, puis charger les plaques ou barrettes de tubes préparées sur leur position lorsque l’instrument le demande.
Conserver l’acide nucléique purié sur de la glace pour une utilisation immédiate, à -20°C pour une utilisation dans le mois qui suit ou à
-80°C pour une conservation à long terme.
8Guide complémentaire de VetMAX™ PRRSV EU & NA 2.0 Kit