3M Molecular Detection Assay 2 - Campylobacter MDA2CAM96, 96 tests, 1 ea Mode d'emploi

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3

Date de parution: 2019-01

Instructions relatives au produit

Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter

Description et utilisation du produit

Le 3M™ Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter est utilisé avec le système de détection moléculaire

3M™ pour la détection rapide et spécique après enrichissement des Campylobacter jejuni, Campylobacter lari et

Campylobacter coli dans les prélèvements environnementaux et les aliments.

Le kit de détection moléculaire Listeria 3M utilise la technique LAMP (amplication isotherme médiée par des boucles)

an d’amplier rapidement les séquences d’acide nucléique de façon extrêmement spécique et sensible, associée à la

bioluminescence pour détecter l’amplication. Les résultats présumés positifs sont visibles en temps réel tandis que les

résultats négatifs sont achés à la n de l’essai. Les résultats présumés positifs doivent être conrmés par les méthodes

usuelles ou en fonction des méthodes spéciques répondant aux normes locales

(1,2)

.

Le 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter est destiné à être utilisé au sein de laboratoires, par des

professionnels formés aux techniques s’y rapportant. 3M n’a pas étudié l’utilisation de ce produit dans des secteurs

autres que l’alimentaire et les boissons. Par exemple, 3M n’a pas étudié ce produit dans le cadre de tests sur des

échantillons de produits pharmaceutiques, cosmétiques, cliniques ou vétérinaires. Le 3M Kit de détection moléculaire

version2-Campylobacter n’a pas été évalué en utilisant tous les produits et processus de transformation alimentaire, tous

les protocoles de test ou toutes les souches bactériennes possibles.

Comme avec toutes les méthodes de test, la source, la formulation et la qualité du milieu d’enrichissement peuvent

inuencer les résultats. Des facteurs tels que les méthodes d’échantillonnage, les protocoles de test, la préparation des

échantillons, la manipulation et les techniques de laboratoires peuvent également inuencer les résultats. 3M recommande

d’évaluer la méthode, notamment le milieu d’enrichissement, dans l’environnement de l’utilisateur à l’aide d’un nombre

d’échantillons susant et avec des charges microbiennes déterminées pour répondre aux critères de l’utilisateur.

3M a évalué le 3M Kit de détection moléculaire version 2 - Campylobacter avec le 3M™ Campylobacter Bouillon

d’Enrichissement et le bouillon d’enrichissement de Bolton sans sang.

L’instrument de détection moléculaire 3M™ est conçu pour être utilisé avec des échantillons traités thermiquement

pendant l’étape de lyse, procédé qui détruit les organismes présents dans l’échantillon. Les échantillons qui n’ont pas

été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent être considérés comme potentiellement

dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection moléculaire 3M.

3M Sécurité Alimentaire respecte la norme ISO (International Organization for Standardization) 9001 en matière de

conception et de fabrication.

Le 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter contient 96tests, décrits dans le tableau1.

Tableau1. Composants du Kit de détection moléculaire 3M

Élément Identication Quantité Table des matières Commentaires

Solution de lyse (LS) 3M™

Solution rose en

tubes transparents

96 (12barrettes de

8tubes)

580µL de LS

partube

Placé sur

portoir et prêt

à l’emploi

Tubes de réactif du 3M™

Kit de détection moléculaire

version2 - Campylobacter

Tubes violets

96 (3poches, contenant

4barrettes de 8tubes)

Mélange spécique

lyophilisé pour

l’amplication et

ladétection

Prêts à l’emploi

Bouchons supplémentaires Bouchons violets

96 (12barrettes de

8bouchons)

Prêts à l’emploi

Contrôle de réactif 3M™ (RC)

Tubes «Flip-Top»

transparents

16 (2poches de 8tubes

individuels)

DNA témoin

lyophilisé, mélange

pour l’amplication

et la détection

Prêts à l’emploi

(Français)

FR

12

Le témoin négatif (NC), non fourni dans le kit, est un milieu d’enrichissement stérile, p. ex. 3M Campylobacter Bouillon

d’Enrichissement. Ne pas utiliser d’eau comme NC.

Un guide de démarrage rapide est disponible à l’adresse www.3M.com/foodsafety

Sécurité

L’utilisateur doit lire, comprendre et suivre toutes les informations de sécurité mentionnées dans les instructions relatives

au système de détection moléculaire 3M et au 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter. Conserver ces

consignes de sécurité pour référence ultérieure.

AVERTISSEMENT: indique une situation dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner un décès, des

blessures graves et/ou des dommages matériels.

AVIS: indique une situation potentiellement dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner des

dommages matériels.

W AVERTISSEMENT

Ne pas utiliser le 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter pour diagnostiquer des pathologies chez

les humains ou les animaux.

L’utilisateur doit former son personnel aux techniques d’analyse actuelles appropriées, par exemple: les bonnes

pratiques de laboratoire

(3)

, la norme ISO/IEC 17025

(4)

ou ISO 7218

(5)

.

An de réduire les risques associés aux faux négatifs, qui peuvent entraîner la diusion de produits contaminés:

• Se conformer au protocole et eectuer les tests en suivant exactement les instructions relatives au produit.

• Conserver le 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter conformément aux indications sur

l’emballage et aux instructions relatives au produit.

• Toujours utiliser le 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter avant la date de péremption.

• Préparer le 3M™ Campylobacter Bouillon d’Enrichissement en suivant les instructions relatives au produit

• Ne pas passer le 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement à l’autoclave

• Utiliser le 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter avec des aliments et des échantillons

environnementaux ayant été validés en interne ou par une tierce partie.

• N’utiliser le 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter qu’avec des surfaces, des désinfectants, des

protocoles et des souches bactériennes validés en interne ou par une tierce partie.

• En cas d’échantillon environnemental contenant un tampon neutralisant avec un composé d’aryle sulfonate, diluer

l’échantillon dans un bouillon d’enrichissement stérile 1:2 avant l’analyse (1volume d’échantillon pour 1volume de

bouillon). Une autre option consiste à transférer 10µL de l’enrichissement du tampon neutralisant dans les tubes

de solution de lyse 3M. Produits pour la manipulation des échantillons 3M™ comprenant un tampon neutralisant

contenant un complexe d’aryle sulfonate: BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB,

HS10NB2G et HS2410NB2G.

An de réduire les risques associés à l’exposition aux produits chimiques et aux dangers biologiques:

• Eectuer les analyses bactériologiques dans un laboratoire correctement équipé et sous la supervision de

professionnels qualiés. Les milieux et les équipements d’enrichissement incubés ou les surfaces ayant été en contact

avec des milieux d’enrichissement incubés peuvent contenir des agents pathogènes à des niveaux susamment élevés

pour entraîner des risques pour la santé humaine.

• Toujours respecter les consignes de sécurité courantes du laboratoire, porter des tenues et lunettes de protection

adaptées lors de la manipulation de réactifs et d’échantillons contaminés.

• Éviter tout contact avec le contenu du milieu d’enrichissement et les tubes de réactifs après l’amplication.

• Éliminer les échantillons enrichis conformément aux normes locales/régionales/nationales/réglementaires actuelles.

• Les échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent

être considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection

moléculaire 3M.

An de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’analyse:

• Toujours porter des gants (an de protéger l’utilisateur et de prévenir l’introduction de nucléases).

An de réduire les risques associés à l’exposition à des liquides très chauds:

• Ne pas dépasser le paramètre de température recommandé sur le dispositif de chaue.

• Ne pas dépasser le temps de chaue recommandé.

(Français)

FR

13

• Utiliser un thermomètre étalonné adapté pour vérier la température du support de bloc chauant pour système de

détection moléculaire 3M™ (p.ex. thermomètre à immersion partielle ou thermomètre à thermocouple numérique

et non un thermomètre à immersion totale). Le thermomètre doit être placé à l’endroit indiqué du support de bloc

chauant pour système de détection moléculaire 3M.

AVIS

An de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’analyse:

• Changer de gants avant l’hydratation des pastilles réactives.

• Utiliser de préférence des pipettes de qualité conforme à la biologie moléculaire, stériles et munies d’embouts à ltre.

• Utiliser une nouvelle pipette pour chaque transfert d’échantillon.

• Utiliser les bonnes pratiques de laboratoire pour transférer l’échantillon de l’enrichissement vers le tube de lyse. Pour

éviter toute contamination des pipettes, l’utilisateur peut choisir d’ajouter une étape de transfert intermédiaire. Par

exemple, l’utilisateur peut transférer chaque échantillon enrichi dans un tube stérile.

• Utiliser un poste de travail de biologie moléculaire disposant si possible d’une lampe germicide.

• Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/ de

fermeture, etc.) avec une solution de 1-5% d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution pour l’élimination

duDNA.

An de réduire les risques associés à un résultat faux positif:

• Ne jamais ouvrir les tubes de réactif après amplication.

• Toujours éliminer les tubes contaminés en les faisant tremper dans une solution d’eau de Javel concentrée à

1-5% (v:v dans l’eau) pendant 1heure. Eectuer cette procédure à distance de la zone de préparation de l’analyse.

• Ne jamais stériliser à l’autoclave les tubes de réactifs après amplication.

Consulter la che de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la réglementation

locale relative à la mise au rebut.

Pour toute question concernant des applications ou procédures spéciques, consulter notre site Internet à l’adresse

www.3M.com/foodsafety ou contacter votre représentant ou distributeur 3M local.

Responsabilité de l’utilisateur

Il incombe aux utilisateurs de prendre connaissance des instructions et des informations relatives au produit. Consulter

notre siteWeb www.3M.com/foodsafety ou contacter votre représentant ou distributeur3M local pour obtenir de plus

amples informations.

Lors du choix d’une méthode d’analyse, il est important d’admettre que des facteurs externes comme les méthodes

d’échantillonnage, les protocoles de test, la préparation des échantillons, la manipulation, les techniques de laboratoire et

l’échantillon lui-même peuvent inuencer les résultats.

Il incombe à l’utilisateur de sélectionner une méthode ou un produit d’analyse adapté pour évaluer un nombre susant

d’échantillons avec les matrices et les souches microbiennes appropriées, an de garantir que la méthode d’analyse est

conforme à ses critères.

Il incombe également à l’utilisateur de déterminer si une méthode d’analyse et ses résultats répondent aux exigences de

ses clients ou fournisseurs.

Comme pour toute méthode d’analyse, les résultats obtenus avec un produit3M Sécurité Alimentaire ne constituent pas

une garantie de la qualité des matrices ou des processus testés.

Dans le but d’aider les clients à évaluer la méthode pour diérentes matrices alimentaires, 3M a élaboré le kit de contrôle

de matrice pour système de détection moléculaire 3M™. Lorsque cela est nécessaire, utilisez le kit de contrôle de matrice

(MC) pour système de détection moléculaire3M pour déterminer si la matrice peut avoir un impact sur les résultats du

3MKit de détection moléculaire version2 - Campylobacter. Tester plusieurs échantillons représentatifs de la matrice,

c.-à-d. des échantillons d’origines diérentes, au cours de toute période de validation lors de l’adoption de la méthode

3Mou dans le cadre d’analyses de matrices nouvelles, inconnues ou ayant subi des modications de matières premières

ou deprocessus.

Une matrice peut être dénie comme un type de produit présentant des propriétés intrinsèques, telles que la composition

et le processus. Les diérences entre les matrices peuvent être aussi simples que les eets causés par leurs diérences de

traitement ou de présentation, par exemple, cru/pasteurisé, frais/sec, etc.

(Français)

FR

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Limitations de garanties/Limites de recours

SAUF SI EXPRESSÉMENT ÉTABLI DANS LA SECTION DE GARANTIE LIMITÉE D’UN EMBALLAGE DE PRODUIT

INDIVIDUEL, 3M RENONCE À TOUTE GARANTIE EXPLICITE ET IMPLICITE, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER,

TOUTE GARANTIE DE COMMERCIALISATION OU D’ADAPTATION POUR UN USAGE SPÉCIFIQUE. En cas de défaut de

tout produit 3M Sécurité Alimentaire, 3M ou son distributeur agréé s’engage, à son entière discrétion, au remplacement

ou au remboursement du prix d’achat du produit. Il s’agit de vos recours exclusifs. Tout défaut supposé du produit

devra être notié à 3M dans un délai de soixante jours et le produit renvoyé au fournisseur. Appeler le Service clientèle

(1-800-328-1671 aux États-Unis) ou votre représentant ociel 3M Sécurité Alimentaire pour obtenir une autorisation

derenvoi.

Limitation de responsabilité de 3M

3M NE SERA PAS TENUE RESPONSABLE DES PERTES OU DES DOMMAGES ÉVENTUELS, QU’ILS SOIENT DIRECTS,

INDIRECTS, SPÉCIFIQUES, ACCIDENTELS OU CONSÉCUTIFS, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER, LES PERTES DE

PROFITS. En aucun cas et en aucune manière, la responsabilité de 3M ne sera engagée au-delà du prix d’achat du produit

prétendu défectueux.

Stockage et mise au rebut

Conserver le 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter entre 2 et 8°C (entre 35 et 47°F). Ne pas

congeler. Conserver à l’abri de la lumière. Une fois le kit ouvert, vérier que le sachet en aluminium est intact. Si ce sachet

est endommagé, ne pas utiliser le kit. Après ouverture, les tubes de réactif non utilisés doivent toujours être conservés

dans le sachet refermable, en laissant l’agent déshydratant à l’intérieur an de maintenir la stabilité des réactifs lyophilisés.

Conserver les poches refermées à une température comprise entre 2 et 8°C (entre 35 et 47°F). Ne pas conserver plus de

90jours.

Ne pas utiliser le 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter après la date de péremption. La date de

péremption et le numéro de lot sont inscrits sur l’étiquette extérieure de la boîte. Après utilisation, il est possible que

les tubes de milieu d’enrichissement et du 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter contiennent des

éléments pathogènes. Lorsque l’analyse est terminée, suivre les normes actuelles du secteur pour l’élimination des déchets

contaminés. Consulter la che de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la

réglementation locale relative à la mise au rebut.

Instructions d’utilisation

Suivre attentivement toutes les instructions. Dans le cas contraire, les résultats obtenus risquent d’être inexacts.

Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/ de fermeture,

etc.) avec une solution de 1-5% d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution pour l’élimination du DNA.

L’utilisateur doit suivre la formation de qualication de l’opérateur (OQ) du système de détection moléculaire 3M, comme

décrit dans le document intitulé «Protocoles et instructions relatifs à la qualication d’installation (IQ)/qualication

opérationnelle (OQ) pour le système de détection moléculaire 3M»

(6)

.

Préparation des milieux

Préparer le 3M™ Campylobacter Bouillon d’Enrichissement (CE250) en suivant les instructions relatives au produit. Ne pas

passer le milieu à l’autoclave avant son utilisation. Utiliser le milieu préparé dans les 24heures qui suivent sa préparation.

Conserver le bouillon préparé à une température comprise entre 2 et 8°C

(7)

à l’abri de la lumière s’il n’est pas utilisé

immédiatement après sa préparation. S’assurer que le milieu se trouve à une température comprise entre 20 et 30°C avant

son utilisation.

Prélèvement des échantillons

Le 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement ne doit pas être utilisé pour le rinçage des carcasses de volaille ou

comme milieu de transport. Collecter et transporter les échantillons suivant vos procédures de collecte d’échantillons

envigueur.

Enrichissement de l’échantillon

Le tableau2 fournit des indications pour les protocoles généraux d’enrichissement des échantillons alimentaires et

environnementaux.

Il incombe à l’utilisateur de valider des protocoles d’échantillonnage ou des proportions de dilution diérent(e)s pour

garantir que cette méthode d’analyse est conforme à ses critères.

(Français)

FR

15

Préparation de l’échantillon

a. Rinçage de la carcasse et rinçage de morceaux de volaille crus

1. Rincer une carcasse de volaille crue vidée de ses viscères à l’aide de 400mL d’eau peptonée tamponnée (BPW)

pendant une minute. Si vous rincez des morceaux de volaille crus, rincez 1,8 à 2kg (4lb±10%) de morceaux de

volaille avec 400mL de BPW

(1,8)

.

2. Pour la carcasse et les morceaux de volaille crus, laisser l’excédent de liquide s’écouler avant de rincer l’échantillon,

pour éviter de transférer du liquide de traitement en excès dans le sac à échantillons

(8)

.

3. Pour la volaille traitée au préalable au chlorure de cétylpyridinium (CPC), il est nécessaire d’ajouter 5mL

par L de Polysorbate80 (IUPAC: monooléate de polyoxyéthylène sorbitane (20); CAS 9005-65-6) au

3MCampylobacter Bouillon d’Enrichissement préparé. Le Polysorbate80 peut être ajouté à de l’eau avant la

stérilisation an de faciliter la dissolution ou il peut être ajouté directement à de l’eau stérile avant de préparer le

3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement.

4. Transférer dans des conditions aseptiques 30mL de solution de rinçage dans un sac stérile et ajouter 30mL de

3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement.

b. Éponge passée sur une carcasse

1. Avant de prélever l’échantillon, les éponges doivent être hydratées. Il est possible d’utiliser jusqu’à 25mL de BPW

avant de prélever l’échantillon

(1)

. En cas de transport des échantillons, s’assurer que le sac est déroulé et conservé

àune température comprise entre 2 et 8°C.

2. Essuyer la carcasse de volaille avec un écouvillon ou prélever l’échantillon à l’aide d’une éponge.

3. Placer l’écouvillon dans un sac stérile et ajouter 25mL de 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement. S’assurer

que l’écouvillon ou l’éponge est bien recouvert(e) du milieu d’enrichissement.

c. Produits à base de volaille crue

1. Dans des conditions aseptiques, peser 325 ±32,5g d’échantillon et le placer dans un sac stérile. Ajouter

1625±32,5mL de BPW au produit à base de volaille crue. Pour disperser les agrégats, mélanger soigneusement

par un bref pétrissage manuel.

2. Après le mélange, ajouter 30mL du mélange de produit à base de volaille crue dans un sac stérile, puis ajouter

30mL de 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement et mélanger soigneusement.

d. Viande crue et prête à consommer

1. Dans des conditions aseptiques, peser 25g d’échantillon et le placer dans un sac stérile. Un sac avec ltre est

recommandé an de faciliter l’échantillonnage.

2. Ajouter 225mL de 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement.

3. Pétrir doucement le sac à la main an de briser les agrégats et éviter la création de bulles lors du mélange. Ne pas

traiter le sac par homogénéisation péristaltique ou homogénéisation mécanique.

e. Pédisacs pour la production primaire

1. Prélever des échantillons à l’aide de pédisacs ou de chaussettes en suivant vos procédures de collecte

d’échantillons en vigueur.

2. Placer UNE chaussette dans un sac stérile et ajouter 100mL de 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement.

f. Écouvillon

1. Prélever l’échantillon à l’aide d’un dispositif préalablement humidié en suivant vos procédures de collecte

d’échantillons en vigueur.

2. Placer l’écouvillon dans un sac stérile et ajouter 100mL de 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement.

Incubation de l’enrichissement

1. Enrouler le sac pour minimiser l’espace vide et éviter le contact de l’enrichissement avec l’air. Pétrir doucement le

sac pendant environ 10±2secondes. Ne pas traiter le sac par homogénéisation péristaltique ou homogénéisation

mécanique et éviter la création de bulles lors du mélange.

2. Incuber le sac dans des conditions aérobies à 41,5 ±1°C, voir le tableau2 pour la durée d’incubation appropriée.

AVERTISSEMENT: si vous choisissez d’utiliser un tampon neutralisant contenant un complexe d’aryle sulfonate comme

solution hydratante pour l’éponge, il sera nécessaire d’eectuer une dilution de 1:2 (1volume d’échantillon pour 1volume

de bouillon d’enrichissement stérile) avant l’analyse, an de réduire les risques associés aux résultats faux négatifs

pouvant libérer du produit contaminé. Une autre option consiste à transférer 10µL de l’enrichissement du tampon

neutralisant dans les tubes de solution de lyse 3M.

(Français)

FR

16

Il incombe à l’utilisateur de valider des protocoles d’échantillonnage ou des proportions de dilution diérent(e)s pour

garantir que cette méthode d’analyse est conforme à ses critères.

Tableau2. Protocoles d’enrichissement généraux.

Matrice de

l’échantillon

Taille de

l’échantillon

3M

Campylobacter

Bouillon

d’Enrichissement

(mL)

(b)

Température

d’enrichissement

(±1°C)

Durée

d’enrichissement

(h)

Volume

d’échantillon

d’analyse

(µL)

(c)

• Rinçages de la

carcasse

(a)

• Rinçages de

morceaux de

carcasse de

volaille

(a)

30mL d’eau de

rinçage dans

de la BPW

30 41,5 22-26 20

• Éponge passée sur

une carcasse

(a)

1éponge

préalablement

humidiée avec

25mL de BPW

aumaximum

25 41,5 22-26 20

• Viande crue

• Viande prête à

consommer

25g 225 41,5 24-28 20

• Pédisacs issus de la

production primaire

1pédisac 100 41,5 22-26 20

• Écouvillon issu

de la production

primaire

1dispositif

préalablement

humidié

100 41,5 22-26 20

(a) Si les carcasses de volaille sont traitées au préalable par du chlorure de cétylpyridinium (CPC), il est nécessaire

d’ajouter 5mL par L de (Polysorbate80; IUPAC: monooléate de polyoxyéthylène sorbitane (20); CAS 9005-65-6)

au 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement préparé. Le Polysorbate80 peut être ajouté à de l’eau avant la

stérilisation ou il peut être ajouté à de l’eau stérile avant de préparer le 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement.

(b) Le 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement doit être utilisé dans les 24heures qui suivent sa préparation. Le

milieu doit être à température ambiante (25 à 30°C) avant d’être utilisé.

(c) Avant de prélever des échantillons d’enrichissement pour les analyser, pétrir doucement le fond du sac. Après avoir

prélevé l’échantillon, enrouler le sac pour minimiser l’exposition de l’échantillon enrichi à l’air. Un échantillon

supplémentaire peut être nécessaire pour eectuer un nouveau test ou pour des étapes de conrmation.

Instructions spéciques pour méthodes validées

AOAC® Performance Tested

SM

(PTM) Certicat nº111803

Dans les études PTM

SM

de l’Institut de recherche de l’AOAC, il a été démontré que le 3M Kit de détection moléculaire

version2 - Campylobacter était une méthode ecace de détection de Campylobacter. Les matrices testées au cours de

l’étude sont répertoriées dans le tableau3.

(Français)

FR

17

Tableau3. Protocole d’enrichissement selon l’AOAC PTM

SM

Certicat nº111803.

Matrice de

l’échantillon

Taille de

l’échantillon

3M

Campylobacter

Bouillon

d’Enrichissement

(mL)

(c)

Température

d’enrichissement

(±1°C)

Durée

d’enrichissement

(h)

Volume

d’échantillon

d’analyse

(µL)

(d)

Carcasse entière rincée

dans 400mL

de BPW

(a) (b)

30mL d’eau de

rinçage dans

de la BPW

30 41,5 22-26 20

Partie de volaille

rincée (1,8 à 2Kg) dans

400mL de BPW

(a) (b)

30mL d’eau de

rinçage dans

de la BPW

30 41,5 22-26 20

Carcasse de dinde

éponge

(a) (b)

1éponge

préalablement

humidiée avec

25mL de BPW

au maximum

25 41,5 24-26 20

Volaille crue hachée

(325 ±32,5g) rincée

dans 1625 ±32,5mL

de BPW

(b)

30mL de

mélange de

produit dans

de laBPW

30 41,5 24-28 20

Croquettes de poulet 25g 225 41,5 24-28 20

(a) Si les carcasses de volaille sont traitées au préalable par du chlorure de cétylpyridinium (CPC), il est nécessaire

d’ajouter 5mL par L de (Polysorbate80; IUPAC: monooléate de polyoxyéthylène sorbitane (20); CAS 9005-65-6)

au 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement préparé. Le Polysorbate80 peut être ajouté à de l’eau avant la

stérilisation ou il peut être ajouté à de l’eau stérile avant de préparer le 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement.

(b) Sinon, cette matrice peut être enrichie avec 30mL de 2X bouillon d’enrichissement Bolton sans sang (BF-BEB) pendant

48 ±2h à 42 ±1,0°C dans des conditions microaérobie. Transférer 20µL d’échantillon dans de la solution de lyse 3M.

(c) Le 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement doit être utilisé dans les 24heures qui suivent sa préparation. Le

milieu doit être à température ambiante (25 à 30°C) avant d’être utilisé.

(d) Avant de prélever des échantillons d’enrichissement pour les analyser, malaxer doucement le fond du sac. Après

avoir prélevé l’échantillon, enrouler le sac pour minimiser l’exposition de l’échantillon enrichi à l’air. Un échantillon

supplémentaire peut être nécessaire pour eectuer un nouveau test ou pour des étapes de conrmation.

Préparation du plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M™

1. Humidier un chion ou une serviette jetable à l’aide d’une solution de 1-5% d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) et

nettoyer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M.

2. Rincer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M à l’eau.

3. Utiliser un chion jetable pour sécher le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M.

4. S’assurer que le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M est sec avant

touteutilisation.

Préparation du support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M™

Poser le support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M sur le plan de travail du laboratoire: le

plateau de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M n’est pas utilisé. Utiliser le bloc refroidissant à la

température ambiante du laboratoire (20 à 25°C).

Préparation du support de bloc chauant pour système de détection moléculaire 3M™

Placer le support de bloc chauant pour système de détection moléculaire 3M dans une unité de traitement thermique

à sec double bloc. Allumer l’unité de traitement thermique à sec et régler la température an que le support de bloc

chauant pour système de détection moléculaire 3M atteigne et conserve une température de 100±1°C.

(Français)

FR

18

REMARQUE: selon l’unité de traitement thermique utilisée, le support de bloc chauant pour système de détection

moléculaire 3M atteint la température souhaitée en 30minutes environ. Utiliser un thermomètre étalonné adapté

(p.ex., un thermomètre à immersion partielle ou un thermomètre à thermocouple numérique, et non un thermomètre à

immersion totale) placé à l’endroit indiqué du support de bloc chauant pour système de détection moléculaire 3M an

de vérier que sa température est de 100±1°C.

Préparation de l’instrument de détection moléculaire 3M™

1. Lancer le logiciel de détection moléculaire 3M™ et ouvrir une session. Contacter votre représentant 3M Sécurité

Alimentaire pour vous assurer d’avoir la version la plus récente du logiciel.

2. Mettre l’instrument de détection moléculaire 3M sous tension.

3. Créer ou modier une analyse en saisissant les données pour chaque échantillon. Pour plus de précisions, consulter le

manuel d’utilisation du système de détection moléculaire 3M.

REMARQUE: l’instrument de détection moléculaire 3M doit être prêt avant l’insertion du plateau de chargement rapide

pour système de détection moléculaire 3M, dans lequel sont placés les tubes de réactif. Cette étape de chauage prend

environ 20minutes; pendant ce processus, un voyant lumineux ORANGE s’allume sur la barre d’état de l’instrument.

Lorsque l’instrument est prêt pour l’analyse, la barre d’état passe au VERT.

Lyse

Retirer le bas du portoir pour tubes de solution de lyse 3M avec un tournevis avant de le placer dans le support de bloc

chauant pour système de détection moléculaire 3M.

1. Laisser les tubes de solution de lyse 3M se réchauer en plaçant le support à température ambiante (20 à 25°C)

pendant une nuit (16 à 18heures). Il est également possible d’amener les tubes de solution de lyse 3M à température

ambiante en les plaçant sur le plan de travail du laboratoire pendant au moins 2heures, en incubant les tubes de

solution de lyse 3M dans un incubateur à 37±1°C pendant 1heure ou en les plaçant dans une unité de traitement

thermique à sec double bloc pendant 30secondes à 100°C.

2. Retourner les tubes recouverts d’un bouchon pour les mélanger. Passer à l’étape suivante dans un délai de 4heures

après avoir retourné les tubes.

3. Retirer l’échantillon enrichi de l’incubateur.

3.1.1 Pétrir doucement le fond du sac contenant l’enrichissement avant de transférer l’échantillon dans le tube de

solution de lyse 3M.

3.1.2 Un échantillon supplémentaire peut être nécessaire pour eectuer un nouveau test ou pour des étapes de

conrmation. Après le prélèvement de l’échantillon, enrouler le sac pour minimiser l’espace vide et éviter le

contact de l’enrichissement avec l’air. Si des résultats présumés positifs doivent être conrmés, eectuer les

étapes suivantes dès l’obtention du résultat présumé positif.

4. Un tube de solution de lyse 3M est nécessaire pour chaque échantillon et pour l’échantillon NC (milieu

d’enrichissement stérile).

4.1 Les barrettes de tubes de solution de lyse 3M peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes

souhaité. Sélectionner le nombre de tubes ou de barrettes de 8tubes nécessaire. Placer les tubes de solution de

lyse 3M dans un portoir vide.

4.2 Pour éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tube de solution de lyse 3M à la fois et utiliser un

nouvel embout de pipette pour chaque étape de transfert.

4.3 Transférer l’échantillon enrichi dans les tubes de solution de lyse 3M comme indiqué ci-dessous:

Transférer tout d’abord chaque échantillon enrichi dans des tubes de solution de lyse 3M individuels. Transférer

le NC en dernier.

4.4 Ouvrir les barrettes de tubes de solution de lyse 3M une à une à l’aide de l’outil d’ouverture/fermeture pour

système de détection moléculaire 3M™- Lyse.

(Français)

FR

19

4.5 Jeter le bouchon du tube de solution de lyse 3M. Si le lysat doit être soumis à un nouveau test, placer les bouchons

dans un récipient propre pour réapplication après la lyse.

4.5.1 Pour le traitement du lysat conservé, voir l’annexeA.

4.6 Transférer 20µL d’échantillon dans un tube de solution de lyse 3M.

5. Répéter les étapes 4.4 à 4.6 en fonction des besoins pour tous les échantillons à analyser.

20 µl

6. Une fois tous les échantillons transférés, transférer 20µL de NC (milieu d’enrichissement stérile, p.ex. BPW) dans un

tube de solution de lyse 3M. Ne pas utiliser d’eau comme NC.

7. Vérier que la température du support de bloc chauant pour système de détection moléculaire 3M est de 100± 1°C.

8. Placer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse 3M dans le support de bloc chauant pour système de

détection moléculaire 3M et chauer pendant 15±1minutes. Lors du chauage, la solution de lyse 3M passera de

rose (froide) à jaune (chaude).

8.1 Les échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent

être considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection

moléculaire 3M.

9. Retirer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse 3M du bloc chauant pour système de détection moléculaire

3M et laisser refroidir dans le support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3Mpendant au

moins 5minutes et au plus 10minutes. Utilisé à température ambiante sans le plateau de bloc refroidissant pour

système de détection moléculaire 3M™, le support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire

3Mdoit être posé directement sur le plan de travail du laboratoire. Une fois froide, la solution de lyse 3M retrouvera

une couleur rose.

10. Retirer le couvercle des tubes de solution de lyse 3M du support de bloc refroidissant pour système de détection

moléculaire 3M.

00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplication

1. Il est nécessaire d’utiliser un tube de réactif du 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter pour

chaque échantillon et pour le NC.

1.1 Les barrettes de tubes peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes souhaité. Sélectionner le

nombre de tubes de réactif du 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter ou de barrettes de

8tubes nécessaire.

1.2 Placer les tubes dans un portoir vide.

1.3 Éviter de toucher les pastilles réactives se trouvant au fond des tubes.

2. Sélectionner un tube de contrôle de réactif 3M et le placer dans le portoir.

3. An d’éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de réactif 3M Kit de détection moléculaire

version2 - Campylobacter à la fois et utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque étape de transfert.

4. Transférer chaque lysat dans un tube de réactif du 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter et dans

un tube de contrôle de réactif 3M comme décrit ci-dessous:

Transférer d’abord chaque lysat d’échantillon dans un tube de réactif du 3M Kit de détection moléculaire version

2 - Campylobacter puis faites de même avec le NC. Hydrater le tube de contrôle de réactif 3M en dernier.

5. Ouvrir les tubes de réactif du 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter un à un à l’aide de l’outil

d’ouverture/fermeture pour système de détection moléculaire 3M™ - Réactif. Jeter le bouchon.

(Français)

FR

20

5.1 Transférer 20μL de lysat d’échantillon prélevé au niveau de la moitié (½) supérieure du liquide (éviter le

précipité) dans le tube de solution de lyse 3M du 3M Kit de détection moléculaire version2 -

Campylobacter

correspondant. Incliner la pipette pour ne pas agiter les pastilles. Mélanger en eectuant 5cycles

d’aspiration/ de refoulement avec la pipette.

5.2 Répéter l’étape5.1 jusqu’à ce que chaque lysat d’échantillon individuel ait été ajouté au tube de réactif du

3MKitde détection moléculaire version2 - Campylobacter correspondant dans la barrette.

5.3 Placer la capsule supplémentaire prévue à cet eet sur les tubes de réactif du 3M Kit de détection moléculaire

version2 - Campylobacter puis prendre le bord arrondi de l’outil d’ouverture/fermeture pour système de détection

moléculaire 3M-Réactif et appuyer dans un mouvement de va-et-vient an de s’assurer que la capsule est

fermement insérée sur le tube.

5.4 Répéter les étapes 5.1 à 5.3 pour tous les échantillons à analyser.

5.5 Lorsque tous les lysats d’échantillons ont été transférés, répéter les étapes5.1 à 5.3 an de transférer 20µL de lysat

de NC dans un tube de réactif du 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter.

5.6 Transférer 20µL de lysat de NC dans un tube de contrôle de réactif 3M. Incliner la pipette pour ne pas agiter les

pastilles. Mélanger en eectuant 5cycles d’aspiration/ de refoulement avec la pipette.

6. Charger les tubes recouverts d’un bouchon dans un plateau de chargement rapide pour système de détection

moléculaire 3M propre et décontaminé. Fermer et verrouiller le couvercle du plateau de chargement rapide pour

système de détection moléculaire 3M.

20 µL

7. Examiner et conrmer l’analyse congurée sur le logiciel de détection moléculaire 3M.

8. Cliquer sur l’icône «Démarrer» du logiciel et sélectionner l’instrument à utiliser. Le couvercle de l’appareil sélectionné

s’ouvre automatiquement.

9. Placer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M dans l’instrument de détection

moléculaire 3M et fermer le couvercle pour lancer l’essai. Les résultats sont obtenus en 60minutes; toutefois, les

résultats positifs peuvent être détectés plus tôt.

10. Une fois l’analyse terminée, retirer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M de

l’instrument de détection moléculaire 3M et tremper les tubes dans une solution d’eau de Javel à 1-5% (v:v dans de

l’eau) pendant 1heure, et ce, à l’écart de la zone de préparation des analyses.

AVIS: pour réduire le risque de résultats faux positifs dus à une contamination croisée, ne jamais ouvrir les tubes de

réactif contenant du DNA amplié. Ceci comprend les tubes de réactif du 3M Kit de détection moléculaire version

2 - Campylobacter, les tubes de contrôle de réactif 3M et les tubes de contrôle de matrice 3M. Toujours éliminer les

tubes de réactif fermés en les trempant dans une solution d’eau de Javel de 1 à 5% (v:v dans de l’eau) pendant 1heure, et

ce à l’écart de la zone de préparation des analyses.

Résultats et interprétation

Un algorithme interprète la courbe de résultats lumineuse provenant de la détection de l’amplication de l’acide nucléique.

Les résultats sont automatiquement analysés par le logiciel et sont codés par couleur en fonction du résultat. Un résultat

positif ou négatif est déterminé par l’analyse d’un nombre de paramètres des courbes individuelles. Les résultats présumés

positifs sont rapportés en temps réel tandis que les résultats négatifs ou à vérier sont achés à la n de l’essai.

Les résultats présumés positifs doivent être conrmés selon les procédures standard des laboratoires ou en suivant

la conrmation de la méthode de référence appropriée

(1,2)

, en commençant par eectuer un transfert du premier

enrichissement du 3M Campylobacter Bouillon d’Enrichissement sur des étalements sélectifs de Campylobacter avec

une incubation microaérophilique et une conrmation des isolats à l’aide des méthodes biochimiques, microscopiques

et sérologiques appropriées. Pour que l’enrichissement se conserve au mieux, enrouler le sac après avoir prélevé un

échantillon.

REMARQUE: même un échantillon négatif ne donnera pas de résultat égal à zéro , car le système et les réactifs

d’amplication du 3M Kit de détection moléculaire version2 - Campylobacter eectuent une lecture d’unité relative de

lumière (RLU) «de base».

(Français)

FR

21

Dans le cas peu probable d’un résultat lumineux inhabituel, l’algorithme considérera ce dernier comme «À vérier».

3Mrecommande à l’utilisateur de recommencer l’essai pour tout échantillon considéré comme «À vérier». Si le résultat

continue à être «À vérier», passer au test de conrmation en utilisant les méthodes usuelles ou en suivant les méthodes

spéciques répondant aux normes locales

(1,2)

.

AnnexeA. Interruption du protocole: Stockage et nouveau test des lysats soumis à un traitement thermique

1. Pour conserver un lysat soumis à un traitement thermique, refermer le tube de solution de lyse 3M avec un bouchon

propre (se reporter à la section Lyse, 4.5)

2. Stocker à une température comprise entre 2 et 8°C jusqu’à 72heures.

3. Préparer un échantillon conservé pour amplication en retournant 2 à 3fois pour mélanger.

4. Ouvrir les tubes.

5. Placer les tubes pour lysats mélangés dans le support de bloc chauant pour système de détection moléculaire

3M et chauer à 100±1°C pendant 5±1minutes.

6. Retirer le portoir de tubes de solution de lyse 3M du bloc chauant pour système de détection moléculaire

3M et laisser refroidir dans le support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M pendant au

moins 5minutes et au plus 10minutes.

7. Poursuivre le protocole à la section Amplication détaillée ci-dessus.

Références:

1. Microbiology Laboratory Guidebook. U. S. Department of Agriculture (USDA) Food Safety and Inspection Service

(FSIS) Microbiology Laboratory guidebook 41.04. Isolation and identication of Campylobacter jejuni/coli/lari from

poultry rinse, sponge and raw product samples. August 1, 2016.

2. ISO 10272-1. Microbiology of the food chain - Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter

spp. Part 1. Detection method.

3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice for

Nonclinical Laboratory Studies.

4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stus - General rules for microbiological examination.

6. 3M Installation Qualication (IQ) / Operational Qualication (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular

Detection System. Contacter un représentant de 3M Sécurité Alimentaire pour obtenir un exemplaire de ce document.

7. ISO 11133. Microbiology of food, animal feed and water - Preparation, production, storage and performance testing of

culture media.

8. U. S. Department of Agriculture (USDA). Food Safety and Inspection Service (FSIS) Directive 10, 250.1. Salmonella and

Campylobacter verication program for raw meat and poultry products. September 20, 2013.

Explication des symboles

www.3M.com/foodsafety/symbols

(Français)

FR

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3M Molecular Detection Assay 2 - Campylobacter MDA2CAM96, 96 tests, 1 ea Mode d'emploi

3M Molecular Detection Assay 2 - Campylobacter MDA2CAM96, 96 tests, 1 ea Mode d'emploi

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