Thermo Fisher Scientific Prionics-Check Western TSE-related PrPSc PR12000 Mode d'emploi

Marque: Thermo Fisher Scientific

Modèle: Prionics-Check Western TSE-related PrPSc PR12000

Taper: Mode d'emploi

Prionics®-Check WESTERN

Test pour la détection in vitro de PrPSc liée aux EST

Au sein de l'Union Européenne, ce test est approuvé comme test rapide pour le programme de test de l'ESB

chez les bovins mis en place conformément au Règlement (CE) No 999/2001

Kit pour 100 échantillons (analyses en double)

©Prionics AG

Version 12.0_f

Uniquement pour utilisation in-vitro en diagnostic

vétérinaire

Conservation à 5±3°C

Produit No.: 12000

Les producteurs de tests rapides d’EST doivent avoir mis en place un système d’assurance qualité, reconnu par le Laboratoire de Référence de l’Union Européenne (EURL), qui garantisse que les

performances du test ne varient pas. Des modifications concernant les outils d’échantillonnage ainsi que du test rapide lui-même ou du protocole du test (y compris l’échantillonnage) peuvent seulement

être apportées après notification préalable au Laboratoire de Référence de l’Union Européenne (EURL) et ne seront accordées qu’à condition que l’EURL ait constaté que les modifications ne réduisent

pas la sensibilité, la spécificité ou la fiabilité du test rapide. Après accord de l’EURL, les détails de la modification doivent être communiqués à la Commission et aux Laboratoires Nationaux de Référence

de l’Union Européenne.

Introduction

Divers tissus d'un animal infecté par les prions

contiennent une variante pathologique, spécifique de

la maladie, de la protéine prion normale (PrP). La

protéine prion modifiée est appelée PrPSc. L'isoforme

normale de la PrP est appelée PrPC (forme cellulaire

de la PrP).

La PrPSc se distingue de la PrPC normale par sa

résistance aux protéases. Lors d'un traitement à la

protéinase K, la PrPC est dégradée, tandis que la

PrPSc voit sa taille diminuer de 32 – 35 kD à 27 – 30

kD. Le fragment PrPSc résistant aux protéases est

appelé PrP27 – 30.

Le test Prionics®-Check WESTERN doit sa précision

et sa fiabilité élevées au fait qu'il vérifie trois paramè-

tres importants: résistance aux protéases, patron de

glycosylation et poids moléculaire plus bas du frag-

ment PrPSc résistant aux protéases (27-30 kD) par

rapport à la PrP normale non digérée.

Les propriétés uniques des solutions tampons utilisées

dans le Prionics®-Check WESTERN et la haute affinité

de l'anticorps permettent d'effectuer le test directement

sur des homogénats de tissu et d'associer la fiabilité

du Western blot à la rapidité requise pour un dépis-

tage sur un grand nombre d'échantillons.

Le test Prionics®-Check WESTERN fut le premier kit

de détection de l'ESB approuvé par les autorités

suisses en 1998. En 1999, il fut officiellement validé

par l'UE comme le seul test à démontrer 100% de

sensibilité et 100% de spécificité sans répétition.

Dans l'étude réalisée par le CRL (Laboratoire Central

de Référence) en 2009 et portant sur la sensibilité

analytique, il a été conclu que Prionics ®-Check WES-

TERN avait une performance 100 fois supérieure au

système de test le plus sensible.

Les données de validation de ce kit ont été certifiés

par l'OIE, basée sur la révision d'experts, pour les

objectifs suivants:

Prêt pour le diagnostic post-mortem de l'encéphalopa-

thie spongiforme chez les bovins et pour les objectifs

suivants:

1. Pour confirmer le diagnostic des cas suspects ou

cliniques (inclut la confirmation d'un test de dépis-

tage positif);

2. Pour estimer la prévalence de l'infection pour

faciliter l'analyse des risques (les régimes de santé

des enquêtes ou des troupeaux ou le contrôle des

maladies, des enquêtes, par exemple, mise en œu-

vre des mesures de lutte contre les maladies) et

d'aider à la démonstration de l'efficacité des politi-

ques de contrôle;

3. Pour confirmer un résultat de test non négatif

obtenu lors de la surveillance active avec un type

de test différent.

Principe du test

Après le prélèvement et l'enregistrement des échantil-

lons, ceux-ci sont analysés avec le Prionics®-Check

WESTERN. Le test Prionics®-Check WESTERN suit

un protocole en cinq étapes, consistant en une homo-

généisation, une digestion par une protéase, une

électrophorèse en gel, un transfert et une détection.

Immunologique. Une personne peut analyser 100

échantillons (en double) en 6-8 heures.

Les échantillons sont prélevés, enregistrés et un

homogénat est préparé à partir d'un morceau de tissu

cérébral bien défini. Un traitement à la protéinase K

dégrade complètement la PrPC tandis que la PrPSc est

réduite à un fragment de 27 - 30 kD. La réaction

protéolytique est arrêtée et la PrPSc est détectée par le

test Prionics®-Check WESTERN.

Les homogénats digérés sont soumis à une électro-

phorèse en gel et à un Western blot. Les membranes

sont incubées avec un anticorps monoclonal – possé-

dant une haute affinité pour PrP – pour la détection de

PrPSc résistant aux protéases. Le signal est visualisé

au moyen du conjugué second anticorps-phosphatase

alcaline (AP).

Contenu du kit

Tous les composants non ouverts ont une durée de

conservation de 1 an après leur production s'ils sont

conservés à 5±3°C. Voir l'étiquette du kit pour la date

effective de péremption. Les stabilités des composants

dilués, ouverts ou reconstitués sont indiquées ci-

dessous. Les données relatives au risque chimique se

trouvent au chapitre "Règles de Sécurité et Classifica-

tions R&S" (Annexe V).

Composant 1

Concentré de tampon d'homogénéisation (5x)

(Concentration 5x, diluer avant utilisation). Une bou-

teille contenant 200 ml d'un tampon d'homogénéisa-

tion concentré 5x. Préparer la solution d'homogénéisa-

tion d'utilisation diluée 1x en mélangeant 1 volume de

tampon d'homogénéisation (5x) et 4 volumes d'eau

ultrapure.

Durée de conservation de la solution d'homogénéisa-

tion d'utilisation:

1 semaine à 5±3°C.

Composant 2

Tampon de digestion (1x) (prêt à l'emploi)

Un flacon contenant 4 ml de tampon de digestion.

Couleur du bouchon pour identification: jaune

Composant 3

Protéinase K (prêt à l'emploi)

Un flacon contenant 4 ml de protéinase K.

Couleur du bouchon pour identification: blanc

Composant 4

Solution d'arrêt de la digestion (1x) (prêt à l'emploi)

Un flacon contenant 4 ml d'inhibiteur de protéinase K

pour l'arrêt de son activité protéolytique.

Couleur du bouchon pour identification: rouge

Composant 5

Echantillon de contrôle (prêt à l'emploi)

Un flacon contenant 200 µl d'un contrôle fonctionnel

(PrPC normale) et de marqueurs de poids moléculaire

(97/66/45/30/20/14 kD) inclus dans du tampon de

charge. Mélanger avant l'emploi, par exemple en

donnant un petit coup sur le tube.

Composant 6

Tampon de charge (1x) (prêt à l'emploi)

Un flacon contenant 25 ml de tampon de charge pour

électrophorèse en gel SDS de polyacrylamide (PAGE).

(Contient du 2-mercapto-éthanol. Les flacons ouverts dégagent une

mauvaise odeur. Toutefois, même si 100 flacons sont ouverts simultané-

ment dans une pièce normalement aérée, les concentrations dans l'air

n'atteignent pas le taux d'exposition à l'environnement sur la place de travail

de 0.65 mg/m3 défini par l'American Industrial Hygiene Association.)

Composant 7

Concentré de tampon de blocage PVDF (5x)

(5x concentré, à diluer avant l'emploi). Un flacon

contient 100 ml de tampon de blocage concentré qui

bloque les sites non spécifiques. Diluer 100 ml de

tampon de blocage avec de l'eau ultrapure dans un

volume final de 0.5 litre.

Composant 8

1er anticorps 6H4

Un tube contenant 30 µl d'anticorps monoclonal anti-

PrP (IgG1 anti-PrP de souris). A diluer à 1:5000 (au

cas où du liquide reste collé aux parois ou au bou-

chon, le tube peut être centrifugé).

Composant 9

2ème anticorps-AP

Un tube contenant 30 µl d'IgG-AP de chèvre anti-

souris, un anticorps dirigé contre l'IgG de souris et

conjugué à la phosphatase alcaline. A diluer à 1:5000

(au cas où du liquide reste collé aux parois ou au

bouchon, le tube peut être centrifugé).

Notice

Prionics

-Check WESTERN

Composant 10

Concentré de tampon de luminescence

(10x concentré, à diluer avant l'emploi). Un flacon

contient 27 ml de tampon concentré de luminescence.

Diluer ce tampon avec de l'eau ultrapure dans un

volume final de 270 ml avant l'emploi.

Contenu supplémentaire du kit:

 Notice

 Etiquettes pour solutions diluées

Equipements additionnels nécessaires

Les équipements en gras ont été homologués pour

une utilisation avec le test Prionics®-Check WES-

TERN. L'utilisateur assume sa responsabilité s'il

emploie d'autres équipements.

Veuillez également consulter notre liste "Matériel et

équipements additionnels pour le test Prionics®-Check

WESTERN" pour des informations plus détaillées

(contactez votre distributeur local ou

[email protected]).

Généralités:

Equipement de laboratoire correspondant aux directi-

ves nationales de sécurité.

 Eau ultrapure: au moins équivalente aux eaux

de grade 3 comme défini par ISO 3696:1987 (E)

 Pipette monocanal (1 – 10 µl)

 Pipette monocanal (10 – 100 µl)

 Pipette monocanal (100 – 1000 µl)

 Pipette monocanal (1 – 5 ml)

 Pipette multicanaux (0.5 – 10 µl)

 Pipette multicanaux (10 – 100 µl)

 Embouts de pipette (tels que recommandés par

le fabricant des pipettes)

 Réservoirs à solution

 Plateaux pour incubation

 Tubes coniques de 15 ml

 Tubes coniques de 50 ml

Homogénéisation:

 Outil de découpe et pincettes

 Balance

 Distributeur pour le tampon d'homogénéisation

 Plaque à 96 puits de 1.2 ml (plaque matrice)

 PrioGENIZER™, appareil d’homogénéisation

avec six racks et un plateau (Prionics AG, pro-

duit N° 10000) et flacons d’homogénéisation

PrioCLIP™ (Prionics AG, produit N° 10010)

ou Homogénéisateur FASTH/MediFASTH ou

FASTH2 (Consul AR S.A., produit N° 80040,

82040, 80020) et flacon d’homogénéisation

Prypcon (Consul AR S.A., produit N° 80300)

ou Homogénéisateur Omnisystem (Omni Interna-

tional Inc., produit No: TH220P) et Omni tips

(Omni International Inc., produit No: 32750)

Digestion par la protéase:

 Plaques à 96 puits (puits de 0.2 ml; utilisées

comme plaques de digestion)

 Film adhésif

 Incubateur pour plaques de microtitrage (mon-

tant jusqu'à 100°C au moins).

Electrophorèse en gel:

 Gels NuPAGE 12% (17 puits) (InvitrogenTM,

produit No: NP0349BOX)

 Solution tampon de migration pour NuPAGE

MOPS/SDS (InvitrogenTM, 500 ml: produit No:

NP0001; 5 l: produit No: NP0001-02)

 Antioxydant pour NuPAGE (InvitrogenTM,

produit No. NP0005)

Transfert:

 Membrane PVDF, Immobilon-P 0.45 µm

(Millipore, produit No: IPVH 00010)

 Méthanol (approx. 98%)

 Tampon de transfert (10x): 30.28 g Tris

base/144.13 g glycine/ compléter à 1000 ml avec

de l'eau ultrapure.

Détection immunologique:

 Solution saline tampon Tris (TBS, pH 7.4): 8 g

NaCl/ 0.2 g KCl/ 3 g Tris base. Compléter à 1000

ml avec de l'eau ultrapure, ajuster le pH à 7.4

avec HCl.

 Solution saline tampon Tris avec Tween (TBST):

TBS avec 0.05% (v/v) Tween-20

 Ponceau S (20x): 0.5% (w/v) Ponceau S/ 5%

(v/v) acide acétique. Diluer à 1x avec TBST

avant l'emploi

 Concentré CDP-Star (= substrat de la phospha-

tase alcaline) (Applied Biosystems, 12.5 mM;

No. cat. MSC050) ou Roche Diagnostics GmbH,

(25 mM; No. cat 1759051) ou CDP-Star, prêt à

l'emploi (Roche Diagnostics; No. cat 2041677)

 Hyperfilm ECL

Déroulement du test

Mesures de précaution

Il convient de respecter rigoureusement les directives

nationales concernant la manipulation des prions (voir

aussi le chapitre "Règles de Sécurité et Classifications

R&S", Annexe V). Le test Prionics®-Check WESTERN

ne doit être pratiqué que dans des laboratoires spécia-

lement équipés à cet effet.

De plus, le test Prionics®-Check WESTERN ne peut

être exécuté que par des personnes ayant une forma-

tion générale sur le travail avec les prions et ayant

suivi en particulier une formation à l’utilisation du test

Prionics®-Check WESTERN.

Les échantillons doivent être considérés comme

potentiellement infectieux et tous les objets en contact

avec les échantillons doivent être considérés comme

potentiellement contaminés.

Les données relatives au risque chimique se trouvent

à l'Annexe V "Règles de Sécurité et Classifications

R&S".

Commentaires

Pour obtenir des résultats optimaux avec le test

Prionics®-Check WESTERN, il est recommandé de

respecter les aspects suivants:

 Respecter rigoureusement le mode opéra-

toire.

 Les embouts de pipettes doivent être remplacés

pour chaque opération de pipetage

 Il est fortement recommandé d'utiliser des

embouts-filtres pour les pipettes ou des pipettes

distinctes pour les différentes étapes. En outre,

la précision du volume de pipetage doit être

contrôlée périodiquement. Les directives natio-

nales s'appliquent.

 Utiliser un réservoir distinct pour chaque réactif

 Les composants du kit ne doivent pas être

utilisés au-delà de leur date de péremption ou si

leur aspect a changé.

 Il ne faut pas utiliser en combinaison des com-

posants de kits provenant de lots ayant des nu-

méros différents.

 Les instruments servant à couper et les pinces

qui seront réutilisés doivent être décontaminés

selon les protocoles définies par les autorités na-

tionales.

 Lorsque le PrioGENIZERTM est utilisé pour

l'homogénéisation, n'utiliser que le programme

P0 PRIONICS TSE.

PRÉLÈVEMENT D'ECHANTILLONS

ET HOMOGENISATION

 Couper 0.45-0.70 g de tissu nerveux de la zone

de préférence, du côté gauche ou du côté droit

du tronc cérébral, par exemple avec un scalpel.

Le prélèvement d'échantillons et les tests en labora-

toire doivent respecter la Réglementation (CE) No

999/2001, chaptire C, qui renvoie, pour ce qui est de

la récolte des échantillons, à la dernière édition de

“Manual Standards for Diagnostic Test and Vaccines

of the International Office of Epizootic Diseases (OIE)”

stipulant que: “Le prélèvement de choix pour un test

immunologique devrait se situer sur l'obex ou aussi

près que possible de celui-ci mais ne devrait pas se

trouver à plus de 1.5 cm devant l'obex”. La figure ci-

dessous montre, encadrée en 4, la zone de prélève-

ment d'échantillons.

Medulla oblongata

L'échantillon est un morceau de tronc cérébral / moelle

épinière cervicale d'une longueur approximative de 8

cm.

Remarque: après le prélèvement des échantillons, une semi-

section complète du tronc cérébral avec une région de l'obex

intacte doit rester disponible pour d'éventuels tests confirmatifs.

HOMOGÉNÉISATION:

Préparation

 Pour obtenir la solution d’utilisation du tampon

d'homogénéisation, diluer le tampon d'homogé-

néisation concentré 5x (composant 1) avec de

l’eau ultrapure (Annexe I)

Homogénéisation

 Transférer l’échantillon dans un récipient d'ho-

mogénéisation et peser sur la balance (0,45 -

0,70 g).

 Ajouter dix fois le volume du tampon d'homogé-

néisation dilué 1x (m/v ; par exemple 5 ml pour

0,50 g de tissu cérébral) et homogénéiser

l’échantillon en utilisant l'appareil d'homogénéi-

sation PrioGENIZER™ (programme P0 PRIO-

NICS TSE), ou FASTH/MediFASTH/ FASTH2

(45 ± 5 s, 20’000 ± 1’000 rpm) ou l'appareil

d'homogénéisation Omnisystem (60 ± 10 sec à

vitesse maximale).

 Conserver deux échantillons de 1 ml par homo-

génat dans une plaque matrice de 96 puits (à

partir d'ici, chaque étape se fera avec deux

échantillons pour chaque homogénat original).

 Les flacons d’homogénéisation PrioCLIP™ et

Prypcon des échantillons testés "TSE négatifs"

peuvent être lavés pour être réutilisés (voir pro-

tocole de lavage des flacons PrioCLIP™ et

Prypcon, Annexe IV).

DIGESTION PAR UNE PROTEASE

Les quantités suivantes sont données pour 48 échan-

tillons (voir Annexe II pour les volumes requis pour un

nombre d'échantillons différent de 48.)

Préparation

 Ajuster la température de l’incubateur de la

plaque de microtitrage à 48±1°C approximative-

ment 1 heure avant utilisation.

 Ajouter 10 µl de tampon de digestion (compo-

sant 2) dans chaque puits de la plaque de diges-

tion.

Digestion par une protéase

 Transférer 100 µl (mélanger d'abord en aspirant

et en évacuant au moins trois fois avec la pi-

pette) de chaque homogénat de la plaque ma-

trice dans le puits correspondant de la plaque de

digestion, avec une pipette multicanal. La plaque

matrice peut ensuite être recouverte et conser-

vée jusqu'à 12 mois de -20°C à -80°C.

 Ajouter 10 µl de protéinase K (composant 3) à

chaque puits de la plaque de digestion et mé-

langer en aspirant / évacuant à la pipette au

moins trois fois.

 Placer un film de scellement sur la plaque de

digestion.

 Digérer pendant 40±1 min à 48±1°C.

 Interrompre la réaction en ajoutant 10 µl de la

solution d’arrêt de la digestion (composant 4).

Mélanger par pipetage au moins trois fois.

ELECTROPHORESE EN GEL

Préparation

 Préparation des gels NuPAGE 12% à 17 puits:

enlever délicatement le peigne et la bande

1) moelle épinière

2) cerveau

3) région de l'obex

4) zone à utiliser pour le

test Prionics®-Check

WESTERN

5) zone à utiliser par le

Centre de Référence

de l'ESB

Prionics

-Check WESTERN

adhésive blanche au bas du gel.

 Chauffer l'échantillon de contrôle (composant 5)

à 65±3°C pendant 2 - 5 min.

 Régler la température de l'incubateur pour

plaque de microtitrage à 98±4°C, environ

1 heure avant l'utilisation.

Electrophorèse en gel

 Ajouter 100 µl de tampon de charge (composant

6) à l'homogénat digéré dans la plaque de diges-

tion et mélanger en pipetant au moins trois fois.

 Faire bouillir les échantillons à 98± 4°C pendant

5 min ± 30 s.

 La plaque de digestion peut être recouverte avec

un film de scellement et conservée jusqu'à 5

jours de -20°C à -80°C.

 Les échantillons préparés précédemment sont

chauffés à to 65±3°C pendant 2 - 5 min avant

d'être déposés.

Dépôt des échantillons:

 Déposer 10 µl de l'échantillon de contrôle dans

le premier puits.

 Déposer 10 µl des échantillons chauffés par

puits.

 Remplir la cuve intérieure et extérieure avec la

solution tampon pour électrophorèse 1x Nu-

PAGE SDS-MOPS et ajouter 500 µl d'antioxy-

dant NuPAGE uniquement dans la cuve inté-

rieure.

Electrophorèse:

 Faire migrer sous une tension de 200 V jusqu'à

ce que le front de migration se trouve à 1-2 cm

du bas du gel (environ 30 min).

TRANSFERT

Préparation

 Laver la membrane PVDF (Millipore, Immobilon-

P, 0.45 µm, 13 x 17 cm) dans du méthanol (envi-

ron 98%) pendant quelques secondes. L'équili-

brer pendant au moins 10 min dans le tampon

de transfert 1x (pour les volumes requis, voir

Annexe II).

 Remplir la cuve de transfert avec le tampon de

transfert 1x refroidi (5±3°C).

Transfert

Réalisation du sandwich de transfert

 Placer la membrane sur du papier Whatman

imbibé de tampon de transfert 1x ou d'eau ultra-

pure.

 Casser le carde en plastique du gel NuPAGE.

Enlever le haut du gel contenant les puits et le

bas au-dessous du front coloré. Placer le reste

du gel sur la membrane (éviter les bulles d'air).

On peut placer jusqu'à 6 gels sur une même

membrane de la taille ci-dessus (voir Annexe III).

 Recouvrir les gels avec du papier Whatman

imbibé, puis avec la deuxième éponge.

 Fermer la cassette de transfert et la placer dans

la cuve de transfert. Les protéines ont une

charge négative et migrent vers le pôle positif

(rouge) de la cuve de transfert. S'assurer que la

cassette est insérée avec la membrane PVDF

faisant face au pôle positif et les gels faisant

face au pôle négatif.

 Transférer à 150 V pendant 60±2 min à 5±3°C

sous refroidissement continu.

 Retirer la membrane et colorer les protéines

présentes sur la membrane au Rouge Pon-

ceau S. Repérer la position des marqueurs mo-

léculaires. La décoloration se fait avec du TBST

jusqu’à ce que la coloration rouge ait disparu

(environ 2x1 min).

DETECTION IMMUNOLOGIQUE

Blocage:

 Incuber la membrane dans un bac d’incubation

en plastique avec 50±2 ml de tampon de blo-

cage PVDF 1x (composant 7 ; voir Annexe I

pour le schéma de dilution) pendant 35±5 min à

22±3°C sur un agitateur basculant avec agitation

douce.

1er anticorps:

 Diluer 10 µl du premier anticorps 6H4 (compo-

sant 8) dans 50±2 ml de TBST (dilution 1 :5000),

y incuber la membrane pendant 60±5 min à

22±3°C (ou pendant 12-18 h à 5±3°C) sous agi-

tation douce sur un agitateur basculant.

 Rincer 3x les membranes pendant environ 5 min

avec du TBST.

2ème anticorps :

 Diluer 10 µl du deuxième anticorps-AP (compo-

sant 9) dans 50±2 ml de TBST (dilution 1 :5000).

Incuber pendant 30±1 min à 22±3°C sous agita-

tion douce.

 Rincer 5x les membranes pendant environ 5 min

avec du TBST.

Détection:

 Equilibrer la membrane pendant 5 – 10 min dans

50±2 ml de solution tampon de luminescence 1x

(composant 10 ; voir Annexe I pour le tableau de

dilution).

 Diluer 100 µl de CDP-Star (12.5 mM ; 50x) ou 50

µl (25 mM ; 100x) dans 5 ml de tampon de lumi-

nescence 1x.

 Placer la membrane sur une plaque de verre.

Répartir uniformément 5 ml de la solution CDP-

Star diluée ou 5 ml de la solution prête à l’emploi

sur la membrane et incuber pendant 5±1 min à

22±3°C.

 Enlever l’excès de liquide restant sur la mem-

brane avec un papier absorbant doux et recou-

vrir immédiatement la membrane avec du cello-

phane. Exposer la membrane à un film Hyperfilm

ECL jusqu’à ce que le signal du contrôle positif

soit intense et que le bruit de fond ou la bande

de la protéinase K apparaisse (environ 5 à 20

min). Exposer plus longtemps ou moins long-

temps pour obtenir un signal optimal. Alternati-

vement, un système de détection par caméra

CCD peut être utilisé (par ex. FluorChem™, Al-

pha Innotech Corp.).

INTERPRETATION DES RESULTATS

La figure ci-dessous montre les résultats attendus

pour des échantillons négatifs pour l’EBS, positifs pour

l’EBS, positifs pour la tremblante et des échantillons

témoins. L’échantillon témoin (K) contient l’isoforme

normale de la protéine prion (PrPC), visualisée via la

détection immunologique. La bande diffuse corres-

pondante de 25-35 kD est due à la glycosylation de

PrPC, qui provoque une distribution hétérogène.

ESB

faible

ESB

KNN

fort

kDa

ESB

faible

ESB

KNN

fort

kDa

Les échantillons négatifs (N) ne donnent pas de signal

spécifique. La bande à 31 kD (qui n’est pas toujours

visible) résulte d’une fixation non spécifique de

l’anticorps secondaire à la protéinase K et elle peut

servir de marqueur additionnel pour l’orientation.

Les échantillons positifs (ESBfort ; ESBfaible) donnent

des signaux en trois bandes, la bande du haut (A)

correspond à une protéine de poids moléculaire

d’environ 30 kD. L’intensité du signal de toutes les

bandes (en particulier celle des bandes du bas B et C)

peut être plus faible que ce qui apparaît sur cette

figure mais la bande du haut (A) devrait toujours être

clairement visible. La flèche (D) illustre la différence de

poids moléculaire entre la protéine prion pathogène

digérée et la protéine normale non digérée.

Si ce test est destiné à être utilisé pour le dépistage,

un échantillon répété réactif doit être confirmé par le

laboratoire national de référence en utilisant une

méthode de confirmation supplémentaire. Si il est

utilisé pour confirmation, ce test ne peut être utilisé

qu’en conjonction avec les recommandations de l'OIE

/ LCR.

Remarques générales

Remarque

La présente notice est considérée comme complète et exacte à

la date de sa publication. Prionics AG n’assume aucune

responsabilité de quelque nature que ce soit pour les domma-

ges annexes ou indirects, liés ou consécutifs à l’utilisation de

cette notice.

Responsabilité

Prionics AG garantit que ses produits satisfont, tout au long de

leur durée de vie telle qu’indiquée, aux exigences publiées et

utilisables, dans la mesure où ils sont utilisés conformément

aux instructions. Prionics AG ne fait aucune autre promesse,

explicite ou implicite. Elle ne donne aucune garantie relative à

la facilité d’écoulement sur le marché ou à une quelconque

qualification pour une application particulière. La garantie

donnée dans le présent document et les indications, spécifica-

tions et descriptions des produits de Prionics AG, telles qu’elles

apparaissent dans les catalogues et informations sur les

produits, publiés par Prionics AG, ne peuvent être modifiées

sans l’autorisation écrite expresse d’un représentant de Prio-

nics AG. Toute promesse, orale ou écrite, allant à l’encontre de

cette garantie ou des publications, est interdite, et, si elle est

faite, est considérée comme n’ayant aucun caractère obliga-

toire.

En cas d’infraction à la garantie ci-dessus, la seule obligation

de Prionics AG réside, à sa discrétion, dans la réparation ou le

remplacement du produit considéré ou d’une partie de ce

dernier, du moment que le client de Prionics AG a notifié

l’infraction en temps voulu. Si, après avoir fait tous les efforts

raisonnables, Prionics AG est dans l’impossibilité de réparer ou

de remplacer le produit ou la partie de ce dernier, Prionics AG

rembourse au client toutes les dépenses exposées par ce

dernier pour le produit considéré ou la partie de ce dernier.

Prionics AG n’assume aucune responsabilité pour les domma-

ges consécutifs, accessoires, spéciaux ou autres dommages

indirects qui découlent d’une perte économique ou de domma-

ges matériels subis par un client en conséquence de l’utilisation

de ses produits.

Prionics AG est une compagnie certifiée ISO 9001:2000.

Annexe I

Schémas pour la préparation des solutions diluées

Solution d’homogénéisation 1x

Mélanger les volumes indiqués d’eau ultra pure et de

tampon d’homogénéisation 5x (composant 1) pour

obtenir le volume désiré de solution

d’homogénéisation 1x:

Durée de conservation de la solution

d’homogénéisation 1x: 1 semaine à 5±3°C

Vol. du tampon

d’homogénéisation

(1x)

Volume du tampon

d’homogénéisation

concentré (5x)

(composant 1)

Volume

d’eau

ultrapure

250 ml = 50 ml + 200 ml

500 ml = 100 ml + 400 ml

1000 ml = 200 ml + 800 ml

Tampon de blocage PVDF

Vol. De tampon

blocage PVDF

(1x)

Vol. de tampon de

blocage PVDF (5x)

(composant 7)

Vol. d’eau

ultrapure

500 ml = 100 ml + 400 ml

Tampon de luminescence

Mélanger les volumes indiqués d’eau ultra pure et de

tampon de luminescence (composant 10) pour obtenir

le volume désiré de tampon de luminescence (1x):

Vol. de tampon de

luminescence (1x) Vol. de tampon de

luminescence (10x)

(composant 10)

Vol. d’eau

ultrapure

270 ml = 27 ml + 243 ml

Tampon de migration pour NuPage SDS-MOPS 1x

Vol. de tampon de

migration NuPage

SDS-MOPS (1x)

Vol. de tampon de

migration NuPage

SDS-MOPS (10x)

Vol. d’eau

ultrapure

1000 ml = 50 ml + 950 ml

Prionics

-Check WESTERN

Tampon de transfert

Vol. de

tampon de

transfert (1x)

Vol. de

tampon de

transfert

(10x)

Vol. d’eau

ultrapure Vol. de

méthanol

(98%)

2000 ml = 200 ml + 1600 ml + 200 ml

TBST

Vol. de

TBST (1x) Vol. de TBS

(20x) Vol. d’eau

ultrapure 50%

Tween 20

1000 ml = 50 ml + 950 ml + 1 ml

Ponceau S

Vol. De Ponceau

S (1x) Vol. De Ponceau

S (20x) Vol. de TBST

(1x)

1000 ml = 50 ml + 950 ml

Annexe II

Volumes requis pour divers nombres

d’échantillons

No.

gels

Taille du

plateau

(cm)

Taille de la

membrane TBST 1er

anticorps

6 Grand

(22.4 x 15.6) 13 x 17 cm 50 ml 10 µl

4 Grand

(22.4 x 15.6) 9 x 17 cm 50 ml 10 µl

3 Moyen

(15 x 11.4) 13 x 8.5 cm 25 ml 5 µl

2 Moyen

(15 x 11.4) 9 x 8.5 cm 25 ml 5 µl

1 Petit

(5.5 x 9.5) 4.5 x 8.5 cm 10 ml 1 µl

Taille du

plateau

(cm)

TBST 2ème

anticorps Tampon

de lumi-

nescence

CDP-Star

12.5

mM 25

Grand

(22.4 x

15.6)

50 ml 10 µl 5 ml 100 µl 50 µl

Grand

(22.4 x

15.6)

50 ml 10 µl 4 ml 80 µl 40 µl

Moyen

(15 x 11.4) 25 ml 5 µl 3 ml 60 µl 30 µl

Moyen

(15 x 11.4) 25 ml 5 µl 3 ml 60 µl 30 µl

Petit

(5.5 x 9.5) 10 ml 2 µl 2 ml 40 µl 20 µl

Annexe III

Schéma de placement de gels sur la membrane de

transfert

Schéma recommandé pour le placement de gels sur la

membrane de transfert.

 Plaque de 96 puits avec 48 échantillons en

double, transférés sur six gels à 17 puits.

 Les numéros indiquent les échantillons 1 - 48

(M=marqueur moléculaire avec PrPC non digé-

rée).

Membrane

M, 1, 1, 2, 2, 3, 3, 4, 4, 5, 5, 6, 6, 7, 7, 8, 8

Gel 1

M, 9, 9,10,10,11,11,12,12,13,13,14,14,15,15,16,16

Gel 2

M,17,17,18,18,19,19,20,20,21,21,22,22,23,23,24,24

Gel 3

M,25,25,26,26,27,27,28,28,29,29,30,30,31,31,32,32

Gel 4

M,33,33,34,34,35,35,36,36,37,37,38,38,39,39,40,40

Gel 5

M,41,41,42,42,43,43,44,44,45,45,46,46,47,47,48,48

Gel 6

MembraneMembrane

M, 1, 1, 2, 2, 3, 3, 4, 4, 5, 5, 6, 6, 7, 7, 8, 8

Gel 1

M, 9, 9,10,10,11,11,12,12,13,13,14,14,15,15,16,16

Gel 2

M,17,17,18,18,19,19,20,20,21,21,22,22,23,23,24,24

Gel 3

M,25,25,26,26,27,27,28,28,29,29,30,30,31,31,32,32

Gel 4

M,33,33,34,34,35,35,36,36,37,37,38,38,39,39,40,40

Gel 5

M,41,41,42,42,43,43,44,44,45,45,46,46,47,47,48,48

Gel 6

M, 1, 1, 2, 2, 3, 3, 4, 4, 5, 5, 6, 6, 7, 7, 8, 8

Gel 1

M, 9, 9,10,10,11,11,12,12,13,13,14,14,15,15,16,16

Gel 2

M,17,17,18,18,19,19,20,20,21,21,22,22,23,23,24,24

Gel 3

M,25,25,26,26,27,27,28,28,29,29,30,30,31,31,32,32

Gel 4

M,33,33,34,34,35,35,36,36,37,37,38,38,39,39,40,40

Gel 5

M,41,41,42,42,43,43,44,44,45,45,46,46,47,47,48,48

Gel 6

M, 1, 1, 2, 2, 3, 3, 4, 4, 5, 5, 6, 6, 7, 7, 8, 8

Gel 1

M, 9, 9,10,10,11,11,12,12,13,13,14,14,15,15,16,16

Gel 2

M,17,17,18,18,19,19,20,20,21,21,22,22,23,23,24,24

Gel 3

M,25,25,26,26,27,27,28,28,29,29,30,30,31,31,32,32

Gel 4

M, 1, 1, 2, 2, 3, 3, 4, 4, 5, 5, 6, 6, 7, 7, 8, 8

Gel 1

M, 9, 9,10,10,11,11,12,12,13,13,14,14,15,15,16,16

Gel 2

M, 1, 1, 2, 2, 3, 3, 4, 4, 5, 5, 6, 6, 7, 7, 8, 8

Gel 1

M, 9, 9,10,10,11,11,12,12,13,13,14,14,15,15,16,16

Gel 2

M,17,17,18,18,19,19,20,20,21,21,22,22,23,23,24,24

Gel 3

M,25,25,26,26,27,27,28,28,29,29,30,30,31,31,32,32

Gel 4

M,17,17,18,18,19,19,20,20,21,21,22,22,23,23,24,24

Gel 3

M,25,25,26,26,27,27,28,28,29,29,30,30,31,31,32,32

Gel 4

M,33,33,34,34,35,35,36,36,37,37,38,38,39,39,40,40

Gel 5

M,41,41,42,42,43,43,44,44,45,45,46,46,47,47,48,48

Gel 6

M,33,33,34,34,35,35,36,36,37,37,38,38,39,39,40,40

Gel 5

M,41,41,42,42,43,43,44,44,45,45,46,46,47,47,48,48

Gel 6

Annexe IV

Protocole de lavage des flacons PrioCLIP™

/Prypcon

Instructions générales

Traçabilité de l’échantillon

Les flacons d’homogénéisation PrioCLIP™ /Prypcon

doivent porter le numéro de l’échantillon – apposé, par

ex. à l’aide d’un marqueur ou d’étiquettes résistants à

l’eau – afin de garantir la traçabilité de l’échantillon. Le

marquage des flacons ne peut être ôté qu’après la

remise des résultats.

Traçabilité de l’utilisation des PrioCLIP™ /Prypcon

Les flacons d’homogénéisation ne doivent pas être

utilisés plus de 5 fois. Les flacons PrioCLIP™/Prypcon

doivent être marqués d’un trait ou d’un point à l’aide

d’un marqueur résistant à l’eau après chaque utilisa-

tion.

Ne pas utiliser de désinfectants à base d’hypo-

chlorite pour le lavage.

Préparation

 Remplir deux récipients d’une quantité suffisante

d’eau désionisée (au moins 25 l), afin de permet-

tre l’immersion complète des flacons PrioCLIP™

/Prypcon durant les étapes du lavage.

Egouttement

 Vider les flacons contenant des homogénats

"TSE négatifs" dans une bouteille autoclavable

thermo-résistante ou dans une boîte/flacon jeta-

ble.

 Les flacons dont le contenu a été identifié

comme « initialement réactif » ne doivent pas

être réutilisés et doivent être éliminés

conformément aux directives nationales de

sécurité.

Lavage

 Immerger les flacons PrioCLIP™ /Prypcon vides

dans un récipient contenant de l’eau désionisée,

rincer abondamment

 Inspecter visuellement les flacons

d’homogénéisation en cherchant des détériora-

tions éventuelles et une possible contamination

par du tissu, lors du transfert du premier réci-

pient au second récipient. Eliminer tout flacon

d’homogénéisation PrioCLIP™ /Prypcon abîmé

ou contaminé.

 Immerger les flacons et les incuber pendant au

moins 30 min à 22±3°C.

Séchage

 Sortir les flacons PrioCLIP™ /Prypcon du réci-

pient, secouer pour éliminer l’eau résiduelle et

les laisser sécher complètement à 22±3°C.

 Il est également possible de faire sécher les

flacons PrioCLIP™ /Prypcon dans une étuve de

séchage. Placer les flacons sur une surface ré-

sistante à la chaleur, les chauffer pendant 2 h à

85±5°C et faire sécher pendant une nuit à 50°C

dans une étuve de séchage. Répéter l’étape de

chauffage (2 h, 85±5°C).

 Contrôler visuellement les flacons PrioCLIP™

/Prypcon. Eliminer les flacons qui sont abîmés

ou contiennent des résidus de liquide ou de tis-

su.

 Les flacons PrioCLIP™ /Prypcon sont mainte-

nant prêts à être réutilisés.

Elimination des déchets

 Les homogénats et les solutions de lavage

doivent être éliminés conformément aux directi-

ves nationales de sécurité.

Un protocole de lavage détaillé pour PrioCLIP™/

Prypcon (avec illustrations) peut être demandé à

l’adresse info@prionics.com

Annexe V

Règles de sécurité et classifications R&S

Règles de sécurité

1. Les règles correspondant aux consignes natio-

nales de sécurité doivent être rigoureusement

respectées.

2. Règles de sécurité ACDP

Les laboratoires sont tenus de se conformer aux

Consignes Nationales de Sécurité. Pour orientation,

une directive de sécurité concernant la manipulation

des protéines prions a été publiée par l'ACDP (Adviso-

ry Committee on Dangerous Pathogens): “Transmissi-

ble spongiform encephalopathy agents: safe working

and the prevention of infection”, Department of Health,

London, Grande-Bretagne (on peut se le procurer à

l'adresse suivante: Stationery Office, ISBN

0113221665, Téléphone +44 (20) 7873 9090.

(www.advisorybodies.doh.gov.uk/acdp/tseguidance/in

dex.htm)

Classification R&S

Composant 1

Tampon d'homogénéisation (5x)

Non classifié selon les directives UE

Composant 2 Xn Nocif

Tampon de digestion (1x)

R22: Nocif en cas d'ingestion.

R36/38: Irritant pour les yeux et la peau.

S23: Ne pas respirer les gaz / fumées / vapeurs /

aérosols.

S26: En cas de contact avec les yeux, laver immédia-

tement et abondamment avec de l'eau et consulter un

spécialiste.

S35: Le produit et son récipient doivent être éliminés

de façon sûre.

S36/37: Porter des vêtements de protection, des gants

appropriés.

Composant 3

Protéinase K

Non classifié selon les directives UE.

Composant 4

Interrupteur de digestion (1x)

Non classifié selon les directives UE.

Composant 5

Echantillon de contrôle

Non classifié selon les directives UE.

Composant 6

Tampon de charge pour PAGE

R21: Nocif par contact avec la peau.

R34: Provoque des brûlures.

R52/53: Nocif pour les organismes aquatiques, peut

entraîner des effets néfastes à long terme pour

l’environnement aquatique.

S26: En cas de contact avec les yeux, laver immédia-

tement et abondamment avec de l’eau et consulter un

spécialiste

S35: Le produit et son récipient doivent être éliminés

de façon sûre.

S36/37/39: Porter des vêtements de protection, des

gants appropriés et un appareil de protection des

yeux/du visage.

S45: En cas d'accident ou de malaise, consulter

immédiatement un médecin (lui montrer l'étiquette si

possible).

Composant 7

Tampon de blocage PVDF concentré (5x)

Non classifié selon les directives UE.

Composant 8

1er anticorps 6H4

Non classifié selon les directives UE.

Composant 9

2ème anticorps-AP

Non classifié selon les directives UE.

Composant 10

Tampon de luminescence concentré (10x)

Non classifié selon les directives UE.

Annexe VI

Certification par l’OIE: résumé des études de valida-

tion

Caractéristiques analytiques

Sensibilité analytique

 Des séries de dilution furent testées dans le cadre

de l’étude de validation de l’Union Européenne. Sur

20 homogénats positifs testés à une dilution de 10-

1, 15 s’avérèrent positifs, deux douteux et trois né-

gatifs. Deux échantillons s'avérèrent également

douteux à 10-2 et un seul échantillon à une dilution

de 10-2.5. [Les échantillons positifs furent fournis par

le Central Veterinary Laboratory (CVL), Weybridge :

des échantillons de tronc cérébral et de moëlle épi-

nière furent sélectionnés à partir de bovins présen-

tant des signes cliniques d’ESB confirmés par un

examen histologique.]

Prionics

-Check WESTERN

Spécificité analytique

 Ceci n’a pas été spécifiquement examiné. Cepen-

dant, certaines études de terrain, utilisant des

échantillons prélevés sur des animaux trouvés

morts (animaux souffrant de troubles autres que

l’ESB, par ex. encéphalite, œdème cérébral, rage,

listériose), ont constamment montré que le kit Prio-

nics AG-Check WESTERN dispose d’une bonne

spécificité analytique [cf. Surveillance de l’ESB, D.

Heim et al, Arch Virol, Suppl. 2000, (16):127-33)].

Données de répétabilité

 Les tests effectués sur une période allant de 2002 à

2007 indiquent que le kit pourrait détecter un

échantillon positif pour l’ESB à une dilution de 1/10.

 La répétabilité fut également étudiée lors d’un essai

comparatif de trois tests ESB (Enfer – Bio-Rad Te

SeE – Prionics Check Western), réalisé par le La-

boratoire de Référence Européen de l’ESB (VLA,

Royaume-Uni). La cohérence entre les échantillons

duplicats (n=277) était élevée, à l’exception de

deux cas où le report d’un puits positif adjacent en-

traina une petite bavure non spécifique dans l’un

des puits adjacents d’un échantillon négatif. Ceci

était clairement différent des résultats positifs, qui

étaient de taille caractéristique, en forme de bandes

et présentes à la fois dans les deux puits dupliqués.

Caractéristiques du diagnostic

Détermination du seuil

Ce test ne donne pas de lecture quantitative. La

réponse est qualitative et est basée sur les deux

critères de présence du signal et de sa position. Ceci

permet une discrimination aisée entre les vrais positifs

et les (potentiellement) faux positifs par suite de la PrP

normale non digérée.

Estimations de la sensibilité diagnostique (SeD) et de

la spécificité diagnostique (SpD)

Trois études d’évaluation externes ont été décrites

pour l’estimation de la sensibilité et de la spécificité

diagnostiques:

 Tests réalisés au Laboratoire de Référence Suisse

de l'ESB (NeuroCentre / Université de Berne) en

février 2003 sur 38 échantillons positifs (18 homo-

génats & 20 échantillons tissulaires) du RU / 190

échantillons négatifs du programme de surveillance

Suisse de l’ESB (échantillons tissulaires de bovins

de plus de 30 mois qui avaient été testés négatifs

par histologie / immunohistochimie).

ESB positif par

IHC ESB négatif par

IHC

Test Positif par

Prionics Check-

WESTERN 38 0

Test Négatif par

Prionics Check-

WESTERN 0 190

Sensibilité diagnostique : 100%, CI [90.7 – 100.0%]

Spécificité diagnostique : 100%, CI [98.1 – 100.0%]

 Etude de terrain canadienne, 2003. Faisant suite à

la détection du cas référencé en mai 2003, 2036

cohortes de naissance et d’alimentation furent tes-

tées par immunohistochimie (IHC) et par le kit

Check WESTERN. Ce travail fût réalisé par les la-

boratoires de l’Agence d’Inspection Alimentaire Ca-

nadienne à Lethbridge, Winnipeg, Nepean et St-

Hyacinthe.

ESB positif par

IHC ESB négatif par

IHC

Test Positif par

Prionics Check

WESTERN 1 0

Test Négatif par

Prionics Check

WESTERN 0 2036

Spécificité diagnostique : 100%, CI [99.8 – 100.0%]

 Evaluation des tests pour le diagnostic de

l’Encéphalopathie Spongiforme Transmissible chez

les bovins pour la Commission Européenne, 1999.

Tous les échantillons furent préparés par l’Institut

européen des mesures et matériaux de référence

(IRMM) à Geed, Belgique et présentés à l’analyse

dans un format codé « aveugle » aux différents par-

ticipants (le kit Prionics AG-Check WESTERN était

l’un des quatre kits sélectionnés) : un total de 300

échantillons positifs (prélevés à partir de bovins

montrant des signes cliniques d’ESB et confirmés

par examen histologique – fournis par CVL

Weybridge) et de 100 échantillons négatifs (préle-

vés en Nouvelle Zélande à partir de bovins adultes

sains agés d’au moins 4 ans et confirmés négatifs

par examen histologique).

ESB positif par

histologie ESB négatif par

histologie

Test Positif par

Prionics Check-

WESTERN 300 0

Test Négatif par

Prionics Check-

WESTERN 0 1000

Sensibilité diagnostique : 100%, CI [98.8 – 100%]

Spécificité diagnostique : 100%, CI [99.6 – 100.0%]

Concordance entre les tests

La concordance entre le test Prionics AG-Check

WESTERN avec l’examen histologique et l’IHC est

élevée.

Reproductibilité

Durant l’évaluation de terrain de l’Union Européenne

en 2004, des échantillons furent testés à l’aide du

Prionics AG-Check WESTERN. Ces résultats furent

comparés avec les résultats atteints avec d’autres

tests en cours d’évaluation. Les échantillons furent

divisés en trois catégories : échantillons positifs,

échantillons négatifs et échantillons de faible qualité.

 Un total de 335 échantillons positifs à l’ESB fut

testé dans trois laboratoires (VLA, Newcastle, RU -

Analytico Food BV, Heerenveen, Pays-Bas et La-

boratorio Central de Veterinaria, Algete, Espagne).

 Un total de 24.534 échantillons négatifs à l’ESB fut

testé dans huit laboratoires (Analytico Food BV,

Heerenveen, Pays-Bas; Institut für Veterinärmedi-

zin, Mödling, Autriche ; Instituut voor Dierhouderij

en Diergezondheid, Lelystad, Pays-Bas ; Laborato-

rio EET, Leon, Espagne ; Labor Dr. Guenteert, Lu-

zern, Suisse ; Instituto Zooprofilatiico Sperimentale

del Piemonte, Turin, Italie ; Irish Equine Centre,

Kildare, Irlande ; Arthus Biotech GmbH, Hamburg,

Allemagne).

 En plus, 423 échantillons de faible qualité furent

testés dans deux laboratoires (VLA, Newcastle, RU

et NeuroCentre, Berne, Suisse).

Les résultats inter-laboratoires de tous les échantillons

testés furent identiques pour le Prionics AG-Check

WESTERN. Les concordances avec les autres tests

en cours d’évaluation furent très élevées, à l’exception

d’un échantillon faiblement positif détecté par le test

Prionics AG-Check WESTERN et qui n’avait pas été

identifié comme positif lors de l’utilisation du test

Ceditect.

Source: Rapport: The Field Trial of Seven New Rapid

Post Mortem Test for the Diagnosis of Bovine Spongi-

form Encephalopathy in Bovines; IRMM; 12 Novembre

2004

Applications

Prionics AG-Check WESTERN est actuellement utilisé

à la fois par les Laboratoires de Référence et de

routine à travers le monde entier.

Les laboratoires d’essai devraient participer à des

essais d’aptitude et des programmes de formation des

laborantins organisés par les Laboratoires de Réfé-

rence de l’OIE.

Référence:

1. OESCH B, DOHERR M, HEIM D. FISCHER K, EGLI S,

BOLLIGER S, BIFFIGER K, SCHALLER O, VANDEVELDE

M, MOSER M.; Application of Prionics Western blot-

ting procedure to screen for BSE in cattle regularly

slaughtered at Swiss abattoirs; Arch Virol 2000;

Suppl 16:189-195

2. DOHERR MG, OESCH B, MOSER M, VANDEVELDE M,

HEIM D.; Targeted surveillance for bovine spongi-

form encephalopathy; Veterinary Record 1999 Dec

4; 145:672

3. SCHALLER O, FATZER R, STACK M, CLARK J, COOLEY

W, BIFFIGER K, EGLI S, DOHERR M, VANDEVELDE M,

HEIM D, OESCH B, MOSER M.; Validation of a West-

ern immunoblotting procedure for bovine PrPSc

detection and its use as a rapid surveillance

method for the diagnosis of bovine spongiform en-

cephalopathy (BSE); Acta Neuropathol (Berl). 1999

Nov;98(5):437-43

4. CALAVAS D, DUCROT C, BARON T, MORIGNAT E,

VINARD JL, BIACABE AG, MADEC JY, BENCSIK A, DE-

BEER S, ELIAZSEWICZ M.; Prevalence of BSE in

western France by screening cattle at risk: prelimi-

nary results of a pilot study; Vet Rec 2001 Jul

14;149:55-56

5. D. HEIM, D AND WILESMITH, JW; Surveillance of BSE;

Arch Virol, Suppl. 2000, (16):127-33

6. Chapter 2.4.6., Bovine Spongiform Encephalopathy;

Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Ter-

restrial Animals. 2012, OIE

7. European Food Safety Authority (EFSA), Parma,

Italy, Scientific Opinion on Analytical sensitivity of

approved TSE rapid test, EFSA Panel on Biological

Hazards (BIOHAZ), EFSA Journal 2009;

7(12):1436

Contact

Prionics AG

Wagistrasse 27a

CH-8952 Schlieren-Zurich

Switzerland

Tél. +41 44 200 2000

Fax +41 44 200 2010

www.prionics.com

[email protected]

Pour notre réseau de distribution, prière de se référer

à la page web www.prionics.com

Validé et certifié par l'OIE comme étant propres aux

fins définies dans la présente notice

Numéro d'enregistrement:20080102

Thermo Fisher Scientific Prionics-Check Western TSE-related PrPSc PR12000 Mode d'emploi

Marque: Thermo Fisher Scientific

Modèle: Prionics-Check Western TSE-related PrPSc PR12000

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Thermo Fisher Scientific Prionics-Check Western TSE-related PrPSc PR12000 Mode d'emploi

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