nal von minden NADAL Troponin I Test Manuel utilisateur

nal von minden GmbH

Carl

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Zeiss

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Strasse 12

47445 Moers

Germany

Moers

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www.nal-vonminden.com

info@nal-vonminden.com

Sandra von Minden

Roland Meißner

Thomas Zander

HRB 5679

Steuer-Nr. 244/133/00130

UST-ID-Nr. DE 189 016 086

Version

2.0, 2018-11-07

NADAL® Troponin I Test

(test cassette)

REF 282041N-05/282041N-10/282041N-20

Gebrauchsanweisung 2

Instructions for use 6

Instructions d’utilisation 10

Instrucciones de uso 14

Istruzioni per l’uso 18

Sposób użycia 22

Instruções de Utilização 26

Návod k použití 30

Käyttöohje 34

Användarinstruktioner 38

Bruksanvisning 42

Symbols 47

Our Teams 48

DE

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NO

DEUTSCH NADAL® Troponin I Test (Ref. 282041N-05/282041N-10/282041N-20)

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1. Verwendungszweck und Anwendungsbereich

Der NADAL® Troponin I Test ist ein chromatographischer

Immunoassay im Lateral-Flow-Format zum qualitativen

Nachweis von kardialem Troponin I in humanen Vollblut-,

Serum- oder Plasmaproben. Der Test liefert ein vorläufiges

Testergebnis als Hilfsmittel bei der Diagnose eines

Myokardinfarkts (MI). Der NADAL® Troponin I Test ist nur für

den professionellen Gebrauch ausgelegt.

Das mit dem NADAL® Troponin I Test erhaltene, vorläufige

Ergebnis sollte nicht zur Ausschlussdiagnose eines MI

verwendet werden.

2. Einleitung und Diagnostische Bedeutung

Das kardiale Troponin I (cTnI) ist ein Protein mit einem

Molekulargewicht von 22,5 kDa, welches im Herzmuskel

vorkommt. Troponin I ist Teil des Troponin-Komplexes, der

außerdem aus Troponin T und Troponin C besteht. Zusammen

mit Tropomyosin bildet dieser Proteinkomplex den Haupt-

bestandteil, der die kalziumempfindliche ATPase-Aktivität von

Actomyosin in quergestreiften Skelett- und Herzmuskeln

reguliert. Nach Auftreten einer Herzschädigung wird kardiales

Troponin I 4-6 Stunden nach Einsetzen des Schmerzes im Blut

freigesetzt. Die Freisetzung von cTnI ähnelt der von CK-MB;

aber während die CK-MB-Konzentration nach 72 Stunden auf

das normale Niveau zurückkehrt, bleibt Troponin I über 6-10

Tage hinweg erhöht und bietet somit ein größeres Zeitfenster

für den Nachweis einer Herzschädigung. Die hohe Spezifität

von cTnI-Messungen zum Nachweis einer myokardialen

Schädigung konnte unter anderem bei operativen Eingriffen,

nach Marathonläufen oder bei stumpfen Thoraxtraumata

demonstriert werden. Eine Freisetzung von cTnI konnte auch

bei anderen Herzleiden als dem akuten Myokardinfarkt (AMI)

belegt werden, wie z. B. bei instabiler Angina, Stauungs-

insuffizienz und Ischämieschäden aufgrund einer Koronarar-

terien-Bypass-Operation. Wegen seiner hohen Sensitivität und

Spezifität für myokardiales Gewebe ist Troponin I in letzter

Zeit zu einem der bevorzugten Biomarker für einen

Myokardinfarkt geworden.

3. Testprinzip

Der NADAL® Troponin I Test ist ein chromatographischer

Immunoassay im Lateral-Flow-Format zum qualitativen

Nachweis von kardialem Troponin I in humanen Vollblut-,

Serum- oder Plasmaproben.

Der Test ermöglicht den Nachweis von cTnl durch visuelle

Interpretation der Farbentwicklung auf dem internen

Teststreifen.

Der Nachweis von Troponin I erfolgt mit Hilfe zweier

spezifischer anti-cTnI-Antikörper, von denen einer farb-

markiert ist und der andere die Bindung an ein im

Testlinienbereich immobilisiertes Fängerreagenz vermittelt.

Das Gemisch wandert dann durch Kapillarkraft die Membran

entlang. Wenn in der Probe eine ausreichende Menge an cTnl

vorhanden ist, erscheint eine farbige Linie im Testlinienbereich

(T) der Membran. Das Vorhandensein dieser farbigen Linie

deutet auf ein positives Ergebnis hin, während ihre

Abwesenheit auf ein negatives Ergebnis hinweist.

Das Erscheinen der farbigen Linie im Kontrolllinienbereich (C)

dient als Verfahrenskontrolle und weist darauf hin, dass

genügend Probenvolumen hinzugegeben wurde und dass die

Membran ausreichend durchnässt ist.

4. Bestandteile der Testpackung

•5/10/20 NADAL® Troponin I Testkassetten (inkl. Einweg-

pipetten)

•5/10/20 heparinisierte Kapillarröhrchen

•1 Puffer “Buffer”

•1 Gebrauchsanweisung

5. Zusätzlich benötigte Materialien

•Probensammelbehälter

•Zentrifuge (nur für Serum- oder Plasmaproben)

•Alkoholpad

•Lanzetten (nur für Vollblutproben aus Fingerpunktion)

•Hütchen für Kapillarröhrchen (nur für Vollblutproben aus

Fingerpunktion)

•Timer

6. Haltbarkeit und Lagerung der Reagenzien

NADAL® Troponin I Test-Kits sollten bei 2-30°C gelagert und

bis zum auf der Verpackung angegebenen Verfallsdatum

verwendet werden. Testkassetten sollten bis zur Verwendung

in versiegelten Folienbeuteln verbleiben. Frieren Sie die Test-

Kits nicht ein. Verwenden Sie die Tests nicht nach dem

Verfallsdatum. Es ist darauf zu achten, dass die Bestandteile

des Test-Kits vor Kontamination geschützt sind. Verwenden

Sie den Test nicht, wenn es Anzeichen einer mikrobiellen

Kontamination oder einer Ausfällung gibt. Biologische

Kontaminationen von Dosiervorrichtungen, Behältern oder

Reagenzien können zu falschen Ergebnissen führen.

7. Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen

•Nur für den professionellen in-vitro-diagnostischen

Gebrauch.

•Lesen Sie die komplette Gebrauchsanweisung vor der Test-

durchführung sorgfältig durch.

•Tests nicht nach dem auf der Verpackung angegebenen

Verfallsdatum verwenden.

•Tests nicht verwenden, wenn der Folienbeutel beschädigt

ist.

•Tests nicht wiederverwenden.

•Proben nicht in das Reaktionsfeld (Ergebnisfeld) geben.

•Das Reaktionsfeld (Ergebnisfeld) nicht berühren, um

Kontaminierung zu vermeiden.

•Zur Vermeidung von Kreuzkontaminationen sollte für jede

Probe ein eigener Probensammelbehälter verwendet

werden.

•Keine Bestandteile aus unterschiedlichen Test-Kits aus-

tauschen oder mischen.

•Essen, trinken oder rauchen Sie nicht in dem Bereich, in

dem mit Proben und Test-Kits umgegangen wird.

•Tragen Sie beim Umgang mit Proben Schutzkleidung wie

Laborkittel, Einmalhandschuhe und Schutzbrille.

•Behandeln Sie alle Proben so, als ob sie infektiöse

Reagenzien enthielten. Beachten Sie bestehende Vorsichts-

maßnahmen für mikrobiologische Risiken während aller

Verfahren sowie Standardrichtlinien für die korrekte

Probenentsorgung.

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•Dieser Test enthält Erzeugnisse tierischen Ursprungs.

Zertifizierte Kenntnisse der Herkunft und/oder des

Gesundheitszustands der Tiere gewährleisten nicht völlig

die Abwesenheit übertragbarer Pathogene. Es wird daher

empfohlen, diese Produkte als potentiell infektiös zu

betrachten und sie gemäß den üblichen Sicherheits-

vorkehrungen zu behandeln (z.B. Verschlucken oder

Einatmen vermeiden).

•Feuchtigkeit und Temperatur können Testergebnisse

beeinträchtigen.

•Benutzte Testmaterialien sollten gemäß lokalen Vorgaben

entsorgt werden.

8. Probennahme, -vorbereitung und -lagerung

Der NADAL® Troponin I Test kann mit Vollblut (aus Venen-

oder Fingerpunktion), Serum oder Plasma durchgeführt

werden.

Vollblutprobenentnahme aus Fingerpunktion

•Waschen Sie die Hand des Patienten mit Seife und warmem

Wasser oder säubern Sie sie mit einem Alkoholpad. Lassen

Sie sie trocknen.

•Massieren Sie die Hand ohne dabei die Einstichstelle zu

berühren, indem Sie die Hand abwärts in Richtung der

Kuppe des Mittel- oder Ringfingers reiben.

•Stechen Sie die Haut mit einer sterilen Lanzette. Wischen

Sie den ersten Blutstropfen ab.

•Reiben Sie vorsichtig die Hand vom Handgelenk zur

Handfläche und zum Finger, damit sich auf dem Einstich-

punkt ein runder Tropfen bildet.

Vollblutproben aus Fingerpunktion sollten unverzüglich

getestet werden.

Vollblutproben aus Venenpunktion

Für die Aufbereitung von venösem Vollblut oder Plasma-

proben sollten Probensammelbehälter mit Antikoagulanzien,

wie z. B. EDTA, Citrat oder Heparin, verwendet werden.

Die Testung sollte unmittelbar nach der Probenentnahme

durchgeführt werden. Bewahren Sie Proben nicht bei

Raumtemperatur über einen längeren Zeitraum auf.Venöses

Vollblut sollte bei 2-8°C aufbewahrt werden, wenn der Test

innerhalb von 2 Tagen nach Probenentnahme durchgeführt

wird.

Frieren Sie die Vollblutproben nicht ein.

Serum- und Plasmaproben

Trennen Sie Serum oder Plasma so schnell wie möglich vom

Blut, um eine Hämolyse zu vermeiden. Verwenden Sie nur

klare, nicht hämolysierte Proben.

Die Testung sollte unmittelbar nach der Probenentnahme

durchgeführt werden. Bewahren Sie Proben nicht bei

Raumtemperatur über einen längeren Zeitraum auf. Serum-

und Plasmaproben können bei 2-8°C bis zu 3 Tage gelagert

werden. Für eine längere Lagerung sollten die Proben bei

-20°C gelagert werden.

Bringen Sie Proben vor der Testdurchführung auf Raum-

temperatur. Eingefrorene Proben sollten vor Testdurch-

führung vollständig aufgetaut und gut gemischt werden.

Proben sollten nicht wiederholt eingefroren und aufgetaut

werden.

Wenn Proben versendet werden sollen, sollten diese unter

Einhaltung von geltenden Vorschriften für den Transport

ätiologischer Krankheitserreger verpackt werden.

Ikterische, lipämische, hämolytische, wärmebehandelte oder

kontaminierte Proben können zu falschen Testergebnissen

führen.

9. Testdurchführung

Bringen Sie alle Tests, Proben, Puffer und/oder Kontrollen

vor der Testdurchführung auf Raumtemperatur (15-30°C).

1. Entnehmen Sie die Testkassette dem verschlossenen

Folienbeutel und verwenden Sie sie so schnell wie möglich.

Die besten Ergebnisse werden erhalten, wenn der Test

unverzüglich nach der Öffnung des Folienbeutels durch-

geführt wird. Kennzeichnen Sie die Testkassette mit der

Patienten- oder Kontrollidentifikation.

2. Legen Sie die Testkassette auf eine saubere und ebene

Oberfläche.

3. a) Für Serum- oder Plasmaproben:

Halten Sie die Pipette senkrecht und

geben Sie 2 Tropfen (ca. 50 μL) der

Serum-/Plasmaprobe in die Proben-

vertiefung (S) der Testkassette.

b) Für Vollblutproben aus Venen-

punktion:

Halten Sie die Pipette senkrecht und

geben Sie 3 Tropfen (ca. 75 μL) der

Vollblutprobe in die Probenvertiefung (S)

der Testkassette. Anschließend geben

Sie 1 Tropfen Puffer hinzu.

c) Für Vollblutproben aus Finger-

punktion:

I. Mittels Kapillarröhrchen

Entnehmen Sie mit dem Kapillarröhrchen

eine Blutprobe bis es sich komplett (ca.

100 μL) mit Blut gefüllt hat. Vermeiden

Sie Luftblasen. Geben Sie die gesamte

Vollblutprobe in die Probenvertiefung (S)

der Testkassette. Anschließend geben

Sie 1 Tropfen Puffer hinzu.

II. Mittels hängender Tropfen

Positionieren Sie den Finger des

Patienten so, dass der Bluttropfen genau

über der Probenvertiefung (S) der Test-

kassette ist. Lassen sie 3 hängende

Tropfen Vollblut aus Fingerpunktion in

die Mitte der Probenvertiefung (S) der

Testkassette fallen. Anschließend geben

Sie 1 Tropfen Puffer hinzu.

4. Starten Sie den Timer.

5. Warten Sie darauf, dass die farbige(n)

Linie(n) erscheint/en. Werten Sie das

Testergebnis nach 10 Minuten aus. Bitte

bestätigen Sie negative Testergebnisse

nach genau 20 Minuten. Nach mehr als

20 Minuten keine Ergebnisse mehr

auswerten.

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10. Testauswertung

Positiv

Zwei farbige Linien erscheinen im Ergebnis-

feld. Eine Linie erscheint im Kontroll-

linienbereich (C), die andere Linie erscheint

im Testlinienbereich (T).

Hinweis:

Die Farbintensität im Testlinienbereich (T) kann abhängig von

der in der Probe vorhandenen Analytkonzentration variieren.

Daher sollte jede Farbtönung im Testlinienbereich (T) als

positives Ergebnis betrachtet werden, auch wenn sie sehr

schwach ist. Beachten Sie, dass es sich bei diesem Test nur um

einen qualitativen Test handelt und dass damit die

Analytkonzentration in der Probe nicht bestimmt werden

kann.

Negativ

Es erscheint nur eine farbige Linie im

Kontrolllinienbereich (C). Im Testlinien-

bereich (T) erscheint keine farbige Linie.

Bitte bestätigen Sie negative Testergebnisse

nach genau 20 Minuten.

Ungültig

Die Kontrolllinie (C) erscheint nicht.

Ergebnisse der Tests, die nach der

festgelegten Auswertezeit keine Kontroll-

linie gebildet haben, müssen verworfen

werden. Überprüfen Sie den Verfahrens-

ablauf und wiederholen Sie die Testung mit

einer neuen Testkassette. Falls das Problem

weiterbesteht, verwenden Sie das Test-Kit

bitte nicht weiter und setzen Sie sich mit

Ihrem Distributor in Verbindung.

Hinweis: Ungenügendes Probenvolumen, hohe Viskosität des

Probenmaterials, abgelaufene Tests oder fehlerhafte Vor-

gehensweise sind die wahrscheinlichsten Ursachen dafür, dass

die Kontrolllinie nicht erscheint.

11. Qualitätskontrolle

Die Testkassette beinhaltet eine interne Verfahrenskontrolle:

Eine im Kontrolllinienbereich (C) erscheinende farbige Linie

wird als interne Verfahrenskontrolle betrachtet. Sie bestätigt

ausreichendes Probenvolumen, eine korrekte Verfahrens-

technik und dass die Membran ausreichend durchnässt ist.

Die Gute Laborpraxis (GLP) empfiehlt den Einsatz von externen

Kontrollmaterialien zum Nachweis der einwandfreien Leistung

des Test-Kits.

12. Grenzen des Tests

• Der NADAL® Troponin I Test ist nur für den in-vitro-

diagnostischen Gebrauch ausgelegt. Der Test sollte nur zum

qualitativen Nachweis von cTnl in Vollblut-, Serum- oder

Plasmaproben verwendet werden. Weder der quantitative

Wert noch die Steigerungsrate der cTnl-Konzentration kann

mit diesem qualitativen Test bestimmt werden.

• Der NADAL® Troponin I Test zeigt nur das Vorhandensein

von cTnI in der Probe an und sollte nicht als einziges

Kriterium für die Diagnose eines Myokardinfarkts

verwendet werden.

• Wenn das Testergebnis negativ ausfällt und klinische

Symptome weiter bestehen, sollten in jedem Fall weitere

Tests unter Verwendung anderer, klinischer Methoden

durchgeführt werden.

• Vollblut-, Serum- oder Plasmaproben von Patienten, die

hohe Konzentrationen an Biotin in Nahrungsergänzungs-

mitteln (Multivitamine, Biotinpräparate selbst oder andere

Ergänzungsmittel für Haar-, Haut- und Nagelwachstum)

einnehmen, können klinisch signifikante inkorrekte (falsch-

negative) Testergebnisse erzeugen. Wenn das Testergebnis

nicht mit dem klinischen Erscheinungsbild eines Patienten

übereinstimmt, kann eine Interferenz mit Biotin als

mögliche Fehlerquelle in Betracht gezogen werden.

• Ein negatives Ergebnis schließt zu keinem Zeitpunkt das

Vorhandensein von cTnI im Blut aus, da die Konzentration

unterhalb der Nachweisgrenze (0,5 ng cTnI/mL) des Tests

liegen kann. Bitte beachten Sie, dass die cTnI-Konzentration

in der Regel erst einige Stunden nach Einsetzen des

Schmerzes ansteigt. Wird zu früh getestet, kann die cTnI-

Konzentration noch zu gering sein, um mit dem Test

verlässlich erfasst zu werden. Bei nur leichter Schädigung

des Herzmuskels werden eventuell nur geringe cTnI

Konzentrationen freigesetzt. Ein negatives Ergebnis schließt

daher zu keinem Zeitpunkt einen möglichen Myokard-

infarkt aus.

• Aufgrund der Heterogenität kommerziell erhältlicher

Standardmaterialien kann die Sensitivität des Tests mit

unterschiedlichen Standards/Messmethoden variieren.

Konzentrationen unterhalb von 0,5 ng/mL werden mit dem

Test nicht mehr verlässlich nachgewiesen.

• Wie bei allen diagnostischen Tests sollte die endgültige

klinische Diagnose nur vom Arzt nach der Evaluierung aller

klinischen und labortechnischen Befunde gestellt werden.

• Unüblich hohe Titer von heterophilen Antikörpern oder

Rheumafaktoren (RF) können die Ergebnisse beeinträch-

tigen. Selbst bei positiven Testergebnissen sollten deshalb

immer die Ergebnisse weiterer klinischer Untersuchungen

für die Erstellung der Diagnose herangezogen werden.

• In seltenen Fällen können Autoantikörper im Blut des

Patienten die Antigen-Antikörper Reaktion im Test

verhindern, indem Bindungsstellen blockiert werden. Dies

kann zu falsch negativen Testergebnissen führen. Bitte

beachten Sie, dass diese Problematik generell bei allen

Testmethoden auftreten kann, bei denen der Protein-

nachweis über eine Antikörperreaktion erfolgt.

• Vollblutproben mit sehr hoher Viskosität können zu

ungültigen Testergebnissen führen. Wiederholen Sie den

Test mit einer Serum- oder Plasmaprobe des gleichen

Patienten mit einer neuen Testkassette. Auch bei

Vollblutproben, die länger als zwei Tage gelagert wurden,

kann es zu Migrationsproblemen kommen.

13. Leistungsmerkmale des Tests

Analytische Sensitivität

Die Nachweisgrenze des Tests liegt bei 0,5 ng cTnI/mL

Probenmaterial. Die Nachweisgrenze wird mit kommerziell

erhältlichem „Human Cardiac Troponin I-T-C Complex“ der

Firma HyTest in der Qualitätskontrolle regelmäßig überprüft.

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Diagnostische Sensitivität und Spezifität

Es wurde eine Korrelationsstudie an 652 negativen

Plasmaproben (EIA bestätigt) und 253 positiven Plasmaproben

(EIA bestätigt) durchgeführt. Die Ergebnisse sind in der

folgenden Tabelle dargestellt:

EIA

NADAL®

Troponin I

Test

+

̶

Total

+

251

4

255

̶

2

648

650

Total

253

652

905

Relative Sensitivität: 99,2% (97,2%-99,9%)*

Relative Spezifität: 99,4% (98,4%-99,8%)*

Gesamtübereinstimmung: 99,3% (98,6%-99,8%)*

*95% Konfidenzintervall

Inter- und Intra-Chargen-Variabilität

Die Inter- und Intra-Chargen-Variabilität des Tests wurde

bestimmt, indem 3 unabhängige Chargen des Tests mit den

cTnI-Konzentrationen von 0 ng/mL, 0,5 ng/mL, 2 ng/mL,

5 ng/mL und 10 ng/mL in einer 10-fach Bestimmung getestet

wurden. Die Proben wurden in >99% der Fälle korrekt

identifiziert.

Kreuzreaktivität

Troponin I negative Proben wurden mit 10.000 ng/mL Skelett-

Troponin I, 2.000 ng/mL Troponin T und 20.000 ng/mL

kardialem Tropomyosin getestet. Es wurde keine Kreuz-

reaktivität festgestellt. Dies zeigt, dass der NADAL®

Troponin I

Test eine hohe Spezifität für cTnI aufweist.

Proben mit hohen Konzentrationen von RF oder heterophilen

Antikörpern können falsch positive Ergebnisse verursachen.

Mit 100 RF-positiven Proben wurden 93% korrekt negative

Ergebnisse erhalten. 96% korrekt negative Ergebnisse wurden

mit 50 heterophile Antikörper-positiven Proben erhalten.

Interferierende Substanzen

Proben von Patienten, die hohe Konzentrationen an Biotin in

Nahrungsergänzungsmitteln einnehmen, können falsch-

negative Testergebnisse erzeugen.

Die nachfolgend aufgelisteten Medikamente und Substanzen

beeinträchtigen bei einer Konzentration von 50 µg/mL (sofern

nicht anders angegeben) die Ausbildung korrekt positiver oder

negativer Testergebnisse mit dem NADAL® Troponin I Test

nicht.

Acetaminophen Captopril Flunarizin

Hydrochlorid Oxazepam

Acetylsalicylsäure

Chloramphenicol

Furosemid Pentoxifyllin

Anisodamine

Chlordiazepoxid

Hydrochlorothiazid

Phenobarbital

Ascorbinsäure Cilazapril Isosorbid

Mononitrat Chinin

Atenolol Diclofenac Labetalol Ramipril

Atorvastatin

Calcium Digoxin Metoprolol

Tartrat D,L-Tyrosin

Koffein Erythromycin Moracizin

Hydrochlorid

Trimethoprim

Bisoprolol-

fumarat Felodipin Nifedipin Verapamil

humanes

Albumin

(110 mg/mL)

Bilirubin

(6 mg/mL)

Hämoglobin

(10 mg/mL)

Cholesterin

(5 mg/mL)

Triglyceride

(15 mg/mL)

14. Referenzen

1. Adams, et al. Biochemical markers of myocardial injury, Immunoassay Circulation

88: 750-763 (1993).

2. Mehegan JP, Tobacman LS, Cooperative interaction between troponin molecules

bound to the cardiac thin filament. J. Biol. Chem. 266:966 (1991)

3. Adams, et al. Diagnosis of Perioperative myocardial infarction with measurements

of cardiac troponin I. N.Eng.J. Med 330:670 (1994).

4. Hossein-Nia M, et al. Cardiac troponin / release in heart transplantation.

Ann.Thorac. Surg. 61 : 227 (1996).

5. Joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology: J.Am. Coll.

Cardio., 36(3), Myocardial Infarction Redefined, 2000.

Rev. 0, 2018-11-07 OM/MK

ENGLISH

NADAL® Troponin I Test (Ref. 282041N-05/282041N-10/282041N-20)

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1. Intended Use

The NADAL® Troponin I Test is a lateral flow chromatographic

immunoassay for the qualitative detection of cardiac

troponin I in human whole blood, serum or plasma samples.

The test provides a preliminary test result as an aid in the

diagnosis of myocardial infarction (MI). The NADAL®

Troponin I Test is designed for professional use only.

The preliminary result obtained with the NADAL® Troponin I

Test should not be used for a diagnosis of exclusion of MI.

2. Introduction and Clinical Significance

Cardiac troponin I (cTnl) is a protein found in the cardiac

muscle with a molecular weight of 22.5 kDa. Troponin I is a

part of a troponin complex which also includes troponin T and

troponin C. Along with tropomyosin, this protein complex

forms the main component that regulates the calcium-

sensitive ATPase activity of actomyosin in striated skeletal and

cardiac muscles. Following a cardiac injury, cardiac troponin I

is released into the blood 4-6 hours after the onset of pain.

The release pattern of cTnl is similar to CK-MB, but whilst the

CK-MB level returns to normal after 72 hours, troponin I

remains elevated for 6-10 days, thus providing a longer time

window for the detection of cardiac injury. The high specificity

of cTnl measurements in the detection of myocardial damage

has been demonstrated during surgical procedures, after

marathon runs or in cases of a blunt chest trauma, amongst

others. The release of cTnl has also been documented in heart

conditions other than acute myocardial infarction (AMI), such

as unstable angina, congestive heart failure and ischemic

damage caused by coronary artery bypass surgery. Because of

its high sensitivity and specificity for myocardial tissue,

troponin I has recently become one of the most preferred

biomarkers for myocardial infarction.

3. Test Principle

The NADAL® Troponin I Test is a lateral flow chromatographic

immunoassay for the qualitative detection of cardiac

Troponin I in human whole blood, serum or plasma samples.

The test enables the detection of cTnl through the visual

interpretation of colour development on the internal test

strip.

The detection of troponin I occurs with the aid of two specific

anti-cTnI antibodies, of which one is colour-coded and the

other mediates the binding to a capture reagent immobilised

in the test region. The mixture migrates along the membrane

by capillary action. If a sufficient amount of cTnl is present in

the sample, a coloured line forms in the test line region (T) of

the membrane. The presence of this coloured line indicates a

positive result, whereas its absence indicates a negative result.

The formation of a coloured line in the control line region (C)

serves as a procedural control, indicating that the proper

volume of sample has been added and membrane wicking has

occurred.

4. Reagents and Materials Supplied

• 5/10/20 NADAL®

Troponin I test cassettes (incl. disposable

pipettes)

• 5/10/20 heparinised capillary tubes

• 1 buffer

• 1 package insert

5. Additional Materials Required

• Sample collection container

• Centrifuge (for serum or plasma samples only)

• Alcohol pad

• Lancets (for fingerstick whole blood samples only)

• Bulbs for capillary tubes (for fingerstick whole blood

samples only)

• Timer

6. Storage & Stability

NADAL® Troponin I test kits should be stored at 2-30°C and

used by the expiry date indicated on the packaging. Test

cassettes should remain in sealed pouches until use. Do not

freeze test kits. Do not use tests beyond the expiry date. Care

should be taken to protect components of the test kit from

contamination. Do not use the test if there is evidence of

microbial contamination or precipitation. Biological

contamination of dispensing equipment, containers or

reagents can lead to false results.

7. Warnings and Precautions

• For professional in-vitro diagnostic use only.

• Carefully read through the test procedure prior to testing.

• Do not use the test beyond the expiry date indicated on the

package.

• Do not use the test if the foil pouch is damaged.

• Do not reuse tests.

• Do not add samples to the reaction area (result area).

• In order to avoid contamination, do not touch the reaction

area (result area).

• Avoid cross-contamination of samples by using a new

sample collection container for each sample obtained.

• Do not substitute or mix components from different test

kits.

• Do not eat, drink or smoke in the area where samples and

test kits are handled.

• Wear protective clothing such as laboratory coats,

disposable gloves and eye protection when samples are

being assayed.

• Handle all samples as if they contain infectious agents.

Observe established precautions for microbiological risks

throughout all procedures and standard guidelines for the

appropriate disposal of samples.

• The test kit contains products of animal origin. Certified

knowledge of the origin and/or sanitary state of the animals

does not completely guarantee the absence of transmissible

pathogenic agents. It is therefore recommended that these

products be treated as potentially infectious, and handled

in accordance with usual safety precautions (e.g., do not

ingest or inhale).

• Humidity and temperature can adversely affect test results.

• Used testing materials should be discarded according to

local regulations.

8. Specimen Collection and Preparation

The NADAL® Troponin I Test can be performed using whole

blood (from venipuncture or fingerstick), serum or plasma.

To collect fingerstick whole blood samples:

• Wash the patient’s hand with soap and warm water or

clean it with an alcohol pad. Allow it to dry.

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•Massage the hand, without touching the puncture site, by

rubbing along the hand towards the fingertip of the middle

or ring finger.

•Puncture the skin with a sterile lancet. Wipe away the first

drop of blood.

•Gently rub the hand from the wrist to the palm, and then to

the finger to form a rounded drop of blood over the

puncture site.

Fingerstick whole blood should be tested immediately.

Venipuncture whole blood samples

Containers containing anticoagulants, such as EDTA, citrate or

heparin should be used for the preparation of venous whole

blood or plasma samples.

Testing should be performed immediately after sample

collection. Do not leave samples at room temperature for

prolonged periods of time.

If the test is to be run within 2 days of sample collection,

whole blood collected by venipuncture should be stored at 2-

8°C.

Do not freeze whole blood samples.

Serum and plasma samples

Separate serum or plasma from blood as soon as possible to

avoid haemolysis. Use only clear, non-haemolysed samples.

Testing should be performed immediately after sample

collection. Do not leave samples at room temperature for

prolonged periods of time. Serum and plasma samples can be

stored at 2-8°C for up to 3 days. For long-term storage,

samples should be kept at -20°C.

Bring samples to room temperature prior to testing. Frozen

samples should be completely thawed and mixed well prior to

testing. Samples should not be frozen and thawed repeatedly.

If samples are to be shipped, they should be packed in

compliance with all applicable regulations for the

transportation of etiologic agents.

Icteric, lipemic, haemolysed, heat-treated and contaminated

samples may lead to inaccurate test results.

9. Test Procedure

Bring tests, samples, buffer and/or controls to room

temperature (15-30°C) prior to testing.

1. Remove the test cassette from the foil pouch and use it as

soon as possible. The best results will be obtained if the

test is performed immediately after opening the foil pouch.

Label the test cassette with the patient or control

identification.

2. Place the test cassette on a clean and level surface.

3. a) For serum or plasma samples:

Holding a pipette vertically, add

2 drops (approximately 50 μL) of a

serum/ plasma sample to the sample

well (S) of the test cassette.

b) For venipuncture whole blood

samples:

Holding a pipette vertically, add

3 drops (approximately 75 μL) of a

whole blood sample to the sample

well (S) of the test cassette, then add

1 drop of buffer to the sample well

(S).

c) For fingerstick whole blood samples:

I. To use a capillary tube:

Apply the end of the capillary tube to

the blood until it is filled completely

(approximately 100 μL). Avoid air

bubbles forming. Dispense the entire

whole blood sample into the sample

well (S) of the test cassette, then add

1 drop of buffer to the sample well

(S).

II. To use hanging drops:

Position the patient’s finger so that a

drop of blood is exactly above the

sample well (S) of the test cassette.

Allow 3 hanging drops of fingerstick

whole blood to fall into the centre of

the sample well (S) of the test

cassette, then add 1 drop of buffer to

the sample well (S).

4. Start the timer.

5. Wait for the coloured line(s) to

appear. Read the test result after 10

minutes. Confirm negative test results

after exactly 20 minutes. Do not

interpret the result after more than

20 minutes.

10. Result Interpretation

Positive

Two coloured lines appear in the result

area. One line appears in the control line

region (C) and the other line appears in the

test line region (T).

Note:

The colour intensity in the test line region (T) may vary

depending on the analyte concentration in the sample.

Therefore, any shade of colour in the test line region should

be considered positive, even if it is weak. Note that this is a

qualitative test only and it cannot determine the analyte

concentration in the sample.

Negative

Only one coloured line appears in the

control line region (C). No coloured line

appears in the test line region (T). Confirm

negative test results after exactly 20

minutes.

Invalid

The control line (C) fails to appear. Results

from any test which has not produced a

control line at the specified reading time

must be discarded. Please review the

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procedure and repeat the test with a new

test cassette. If the problem persists,

discontinue using the test kit immediately

and contact your distributor.

Note: Insufficient sample volume, high sample viscosity,

expired tests or incorrect operating procedure are the most

likely reasons that the control line fails to appear.

11. Quality Control

An internal procedural control is included in the test cassette:

A coloured line appearing in the control line region (C) is

considered an internal procedural control. It confirms

sufficient sample volume, adequate membrane wicking and

correct procedural technique.

Good laboratory practice (GLP) recommends the use of

external control materials to ensure proper test kit

performance.

12. Limitations

•The NADAL® Troponin I Test is for professional in-vitro

diagnostic use only. This test should be used for the

qualitative detection of cTnl in whole blood, serum or

plasma samples only. Neither the quantitative value nor the

rate of increase in cTnl concentration can be determined,

using this qualitative test.

•The NADAL® Troponin I Test only indicates the presence of

cTnl in the sample and should not be used as the sole

criterion for the diagnosis of myocardial infarction.

•If the test result is negative and clinical symptoms persist,

additional tests using other clinical methods should always

be performed.

•Whole blood, serum or plasma specimens from patients

who have been ingesting high levels of biotin in dietary

supplements (multivitamins, biotin supplements them-

selves, or other supplements for hair, skin and nail growth)

may cause clinically significant inaccurate (false negative)

test results. If the test result does not match the clinical

presentation of a patient, biotin interference may be

considered as a possible source of error.

•A negative result does not at any time exclude the presence

cTnI in blood, as its concentration may be below the test’s

detection limit (0.5 ng cTnI/mL). It should be noted that cTnI

concentration usually increases a few hours after the onset

of pain. If tested too early, the cTnI concentration might be

too low to be reliably determined by the test. In case of

slight damage to the cardiac muscle, only low cTnI

concentrations may be released. For this reason, a negative

result does not preclude at any time the possibility of

myocardial infarction.

•Due to the heterogeneity of commercially available

standard materials, the sensitivity of the test may vary with

different standards/measurement methods. Concentrations

below 0.5 ng/mL are no longer reliably detected by the test.

•As with all diagnostic tests, a definitive clinical diagnosis

should only be made by a physician following the evaluation

of all clinical and laboratory findings.

• Unusually high titers of heterophile antibodies or

rheumatoid factors (RF) may affect results. Therefore, even

if test results are positive, the results of further clinical

examinations, therefore, should always be used to make a

diagnosis.

•In rare cases, auto-antibodies in the blood of the patient

prevent the antigen-antibody reaction in the test by

blocking the binding sites. This may lead to false-negative

test results. It should be noted that these problems may

generally occur in all test methods in which protein

detection occurs through an antibody reaction.

•Whole blood samples with a very high viscosity may lead to

invalid test results. Using a new test cassette, repeat the

test with a serum or plasma sample from the same patient.

Whole blood samples which have been stored for more

than 2 days may also cause migration problems.

13. Performance Characteristics

Analytical sensitivity

The detection limit of the test is 0.5 ng cTnI/mL sample.

The detection limit is checked regularly in the quality control

procedure with commercially-available "Human Cardiac

Troponin I-T-C Complex" from the company HyTest.

Diagnostic sensitivity and specificity

A correlation study was performed on 652 negative plasma

samples (EIA confirmed) and 253 positive plasma samples (EIA

confirmed). The results are presented in the following table:

EIA

NADAL®

Troponin I

Test

+

̶

Total

+

251

4

255

̶

2

648

650

Total

253

652

905

Relative sensitivity: 99.2 % (97.2%-99.9%)*

Relative specificity: 99.4% (98.4%-99.8%)*

Overall agreement: 99.3% (98.6%-99.8%)*

*95% Confidence interval

Inter- and intra-lot variability

The inter- and intra-lot variability of the test was determined

by testing 3 independent test lots with the cTnI concentrations

of 0 ng/mL, 0.5 ng/mL, 2 ng/mL, 5 ng/mL and 10 ng/mL in a

10-fold determination. The samples were correctly identified

>99% of the time.

Cross-reactivity

Troponin I negative samples were tested with 10,000 ng/mL

skeletal troponin I, 2,000 ng/mL of troponin T and

20,000 ng/mL cardiac tropomyosin. No cross-reactivity was

observed. This demonstrates that the NADAL® Troponin I Test

is highly specific for cTnI.

Samples with high concentrations of RF or heterophile

antibodies may cause false positive results. 93% correct

negative results were obtained with 100 RF positive samples.

96% correct negative results were obtained with 50

heterophile antibody positive samples.

Interfering substances

Specimens from patients who have been ingesting high levels

of biotin in dietary supplements may exhibit false negative

test results.

Drugs and substances listed below do not affect the

generation of correct positive or negative test results obtained

ENGLISH

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with the NADAL® Troponin I Test at the concentration of

50 μg/mL (unless otherwise indicated).

Acetaminophen Captopril Flunarizine

hydrochloride Oxazepam

Acetylsalicylic acid

Chloramphenicol

Furosemide Pentoxifylline

Anisodamine

Chlordiazepoxide

Hydrochlorothiazide

Phenobarbital

Ascorbic acid Cilazapril Isosorbide

Mononitrate Quinine

Atenolol Diclofenac Labetalol Ramipril

Atorvastatin

Calcium Digoxin Metoprolol

Tartrate D,L-Tyrosine

C a f f e i n e Erythromycin Moracizine

hydrochloride Trimethoprim

Bisoprolol Fumarate

Felodipine Nifedipine Verapamil

Human albumin

(110 mg/mL)

Bilirubin

(6 mg/mL)

Haemoglobin

(10 mg/mL)

Cholesterol

(5 mg/mL)

Triglycerides

(15 mg/mL)

14. References

1. Adams, et al. Biochemical markers of myocardial injury, Immunoassay Circulation

88: 750-763 (1993).

2. Mehegan JP, Tobacman LS, Cooperative interaction between troponin molecules

bound to the cardiac thin filament. J. Biol. Chem. 266:966 (1991)

3. Adams, et al. Diagnosis of Perioperative myocardial infarction with measurements

of cardiac troponin I. N.Eng.J. Med 330:670 (1994).

4. Hossein-Nia M, et al. Cardiac troponin / release in heart transplantation.

Ann.Thorac. Surg. 61 : 227 (1996).

5. Joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology: J.Am. Coll.

Cardio., 36(3), Myocardial Infarction Redefined, 2000.

Rev. 0, 2018-11-07 OM/MK

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1. Domaine d’application

Le test NADAL® Troponin I est un immunodosage chromato-

graphique à flux latéral pour la détection qualitative de la

troponine I cardiaque humaine dans les échantillons de sang

total, de sérum et de plasma. Le test fournit des résultats

provisoires pour appuyer le diagnostic de l'infarctus du

myocarde (IM). Le test NADAL® Troponin I est réservé à un

usage professionnel.

Les résultats obtenus avec le test NADAL® Troponin I sont

provisoires. Un diagnostic final à l'infarctus du myocarde ne

devrait jamais s’appuyer sur les seuls résultats de ce test.

2. Introduction et signification clinique

La troponine I cardiaque (cTnI) est une protéine avec un poids

moléculaire de 22,5 kDa présente dans le myocarde. La

troponine I, la troponine T et la troponine C sont les

composants d'une structure. Avec la tropomyosine, cette

structure forme le composant principal qui régule l'activité

ATPasique calcium-dépendante de l'actomyosine au sein du

muscle squelettique strié et du myocarde. Après un accident

cardiaque, la troponine I est libérée dans le sang entre 4 et 6

heures après le début de la douleur. La libération de la TnI

cardiaque est similaire à celle de la CK-MB, mais alors que la

CK-MB revient à un niveau normal après 72 heures, la

troponine I reste élevée pendant 6 à 10 jours, fournissant ainsi

une fenêtre de détection de l'accident cardiaque beaucoup

plus large. La haute spécificité des mesures de la cTnI pour

l'identification d'une lésion du myocarde a pu être mise en

évidence lors d'interventions opératoires après des courses de

marathon et des traumatismes thoraciques contondants. La

libération de cTnI a été également démontrée dans d'autres

affections que l'infarctus du myocarde aigu (IMA) tels que

l'angor instable, l'insuffisance cardiaque et les lésions

ischémiques à la suite de pontages coronariens. En raison de

sa spécificité élevée et de sa sensibilité dans le tissu

myocarde, la troponine I est récemment devenue le

biomarqueur préférentiel de l'infarctus du myocarde.

3. Principe du test

Le test NADAL® Troponin I est un immunodosage

chromatographique à flux latéral pour la détection qualitative

de la troponine I cardiaque dans les échantillons de sang total,

de sérum et de plasma humain.

La détection de la cTnl se fait par l’interprétation visuelle des

couleurs se développant sur la bandelette interne.

La détection de la troponine I se fait grâce à deux anticorps

spécifiques anti-cTnI. L’un de ces deux anticorps est coloré et

l’autre se lie à un réactif de capture immobilisé à hauteur de la

ligne de test. Le complexe migre le long de la membrane par

capillarité. Si l’échantillon est composé d’une quantité

suffisante de cTnl, une ligne colorée apparaît à hauteur de la

zone de test (T) de la membrane. La présence de cette ligne

colorée indique un résultat positif. L’absence de cette ligne

indique un résultat négatif.

La ligne colorée de contrôle (C) qui apparaît est une procédure

de contrôle interne. Cette ligne confirme que le volume

d'échantillon était suffisant et que la membrane a été

suffisamment imbibée.

4. Réactifs et matériel fournis

•5/10/20 cassettes NADAL®

Troponin I (pipettes à usage

unique incluses)

•5/10/20 tubes capillaires héparines

•1 solution tampon "Buffer"

•1 notice d’utilisation

5. Matériel supplémentaire nécessaire

•Récipient collecteur

•Centrifugeuse (pour les échantillons de sérum ou de

plasma)

•Tampon alcoolisé

•Lancettes (pour les échantillons de sang total recueilli au

bout du doigt)

•Poire de prélèvement (seulement pour le sang total recueilli

au bout du doigt)

•Chronomètre

6. Péremption et conservation des réactifs

Le kit NADAL® Troponin I doit être conservé à une tempé-

rature comprise entre 2 et 30° C jusqu'à la date de péremption

indiquée sur l'emballage. Les cassettes devraient rester dans

leur emballage fermé jusqu'à leur utilisation. Ne pas congeler

les kits. Ne pas utiliser le test au-delà de la date de

péremption. Il est recommandé de protéger les kits de toute

contamination. Ne pas utiliser les tests si des signes de

contaminations bactériennes ou de précipités sont

observables. Une contamination biologique des doseurs, des

contenants ou des réactifs peut entraîner des résultats

faussés.

7. Avertissement et précautions

•Test réservé au diagnostic in-vitro professionnel.

•Lire attentivement la notice d’utilisation avant de réaliser le

test.

•Ne pas utiliser le test après la date de péremption indiquée

sur l’emballage.

•Ne pas utiliser les tests si l’emballage est endommagé.

•Test à usage unique.

•Ne pas déposer de prélèvement sur la zone réactive

(fenêtre de résultats).

•Ne pas toucher la zone réactive afin d’éviter toute

contamination.

•Utiliser un collecteur différent pour chaque échantillon afin

d’éviter tout risque de contaminations croisées.

•Ne pas interchanger ou mélanger le matériel de différents

kits.

•Ne pas manger, boire ou fumer dans la zone de

manipulation du test et des échantillons.

•Utiliser des vêtements de protection tels qu'une blouse de

laboratoire, des gants à usage unique et des lunettes de

protection.

•Manipuler les échantillons en les considérant comme de

potentiels réactifs infectieux. Respecter les précautions

relatives aux risques microbiologiques pendant les

manipulations ainsi que les directives locales en vigueur

concernant l’élimination des déchets.

•Ce test contient des produits d'origine animale. La

certification concernant l’origine et l’état sanitaire des

animaux ne certifient pas l’absence totale d’agents

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pathogènes transmissibles. Tous les prélèvements et

matériaux utilisés pour ce test doivent être considérés

comme des matières infectieuses. Il est recommandé

d’appliquer les mesures de précaution nécessaires (ne pas

avaler ou inhaler).

•L'humidité et les températures peuvent affecter les

résultats du test.

•Les matériaux du test utilisés doivent être éliminés selon les

normes en vigueur.

8. Recueil, préparation et conservation des échantillons

Le test NADAL® Troponin I est réalisé sur des échantillons de

sang total (ponction veineuse ou au bout du doigt), de sérum

et de plasma.

Recueil des échantillons de sang total sur le bout du doigt

•Laver les mains du patient avec du savon et de l'eau chaude

ou nettoyer soigneusement la zone de piqûre avec un

tampon alcoolisé. Bien sécher la main.

•Masser la main en direction du bout du majeur ou de

l'annulaire sans toucher la zone de piqûre.

•Piquer dans le bout du doigt à l'aide d'une lancette stérile.

Essuyer la première goutte de sang.

•Frotter la main du poignet à la paume et au doigt jusqu’à

former une goutte de sang au niveau de la zone de piqûre.

Les échantillons de sang total recueillis au bout du doigt

devraient être testés dès que possible.

Recueil des échantillons de sang total par ponction veineuse

Les échantillons de sang total ou de plasma devraient être

recueillis dans un récipient collecteur contenant un

anticoagulant de type EDTA, citrate ou héparine.

L'analyse devrait être réalisée juste après le recueil des

échantillons. Ne pas conserver les échantillons à température

ambiante pendant une période trop longue. Le sang total

veineux devrait être conservé à une température compris

entre 2 et 8°C si le test est réalisé dans les 2 jours qui suivent

le recueil des échantillons.

Ne pas congeler les échantillons de sang total.

Recueil des échantillons de sérum et de plasma

Séparer le sérum et/ou le plasma rapidement afin d'éviter

toute hémolyse. Utiliser exclusivement des échantillons clairs

et non-hémolysés.

L'analyse devrait être réalisée juste après le recueil des

échantillons. Ne pas conserver les échantillons à température

ambiante pendant une période trop longue. Les échantillons

de sérum et de plasma peuvent être conservés jusqu'à 3 jours

à une température comprise entre 2 et 8°C. Pour une

conservation plus longue, les échantillons devraient être

conservés à -20°C.

Amener tous les échantillons à température ambiante avant la

réalisation du test. Les échantillons congelés devraient être

décongelés avant la réalisation du test et bien mélangés. Ne

pas répéter les cycles de congélation-décongélation.

Si des échantillons doivent être expédiés, leur conditionne-

ment devra respecter la législation locale relative aux agents

étiologiques.

Les échantillons ictériques, lipémiques, hémolytiques,

inactivés par la chaleur ou contaminés peuvent provoquer de

faux résultats.

9. Exécution du test

Amener les tests, les échantillons et/ou les contrôles à

température ambiante (15-30°C) avant la réalisation du test.

1. Sortir la cassette de son emballage fermé et utiliser la

cassette dès que possible. Les résultats seront d'une

meilleure fiabilité si le test est réalisé directement après

l'ouverture de l'emballage. Indiquer les identifiants du

patient et du contrôle sur la cassette.

2. Déposer la cassette sur une surface plane et propre.

3. a) Échantillons de sérum ou de plasma

Tenir la pipette à la verticale et déposer

2 gouttes (env. 50 μl) de l'échantillon de

sérum ou de plasma dans le puits de dépôt

(S) de la cassette.

b) Échantillons de sang total par ponction

veineuse

Tenir la pipette à la verticale et déposer

3 gouttes (env. env. 75 µl) de l'échantillon

de sang total dans le puits de dépôt (S) de la

cassette. Ajouter 1 goutte du réactif.

c) Échantillons de sang total par ponction

capillaire au bout du doigt

I. Tubes capillaires

À l'aide d'un tube capillaire, recueillir un

échantillon de sang jusqu'à ce que le tube

soit complètement rempli (env. 100 μL).

Éviter la formation de bulles d'air. Déposer

la totalité de l'échantillon de sang total dans

le puits de dépôt (S) de la cassette. Ajouter

1 goutte du réactif.

II. Gouttes suspendues

Positionner le doigt du patient de façon à ce

que la goutte de sang soit au-dessus du

puits de dépôt (S) de la cassette. Déposer 3

gouttes suspendues de sang total recueilli

au bout du doigt dans le centre du puits de

dépôt (S) de la cassette. Ajouter 1 goutte du

réactif.

4. Démarrer le chronomètre.

5. Attendre que la ou les lignes colorées

apparaissent. Interpréter le test après 10

minutes. Reconfirmer les résultats négatifs

au bout de 20 minutes. Ne plus interpréter

les résultats après 20 minutes.

10. Interprétation des résultats

Positif

Deux lignes colorées apparaissent. Une

ligne apparaît à hauteur de la zone de

contrôle (C) et une autre ligne apparaît à

hauteur de la zone de test (T).

NOTE

L'intensité de la ligne de couleur à hauteur de la zone de test

(T) peut varier selon la concentration en analytes présents

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dans le prélèvement. Toute coloration de la ligne de test (T)

doit être considérée comme un résultat positif même si cette

coloration est de faible intensité. Ce test permet une

détection qualitative, la concentration en analytes dans

l’échantillon ne peut être déterminée.

Négatif

Une ligne colorée apparaît au niveau de la

zone de contrôle (C). Aucune ligne de

couleur n'apparaît au niveau de la zone de

test (T). Reconfirmer les résultats négatifs

au bout de 20 minutes.

Non-valide

Aucune ligne n’apparaît à hauteur de la

zone de contrôle (C). Les tests sur lesquels

aucune ligne de contrôle n’est apparue

dans le temps d’évaluation fixé doivent être

jetés. Contrôler la procédure d’exécution du

test et répéter le test avec une nouvelle

cassette. Si le problème persiste, ne plus

utiliser le kit du test et contacter le

distributeur.

Remarque : Un volume d'échantillon insuffisant, une

mauvaise manipulation ou des tests périmés sont les raisons

principales d'absence de ligne de contrôle.

11. Contrôle qualité

La cassette contient une procédure de contrôle interne.

La ligne colorée apparaissant au niveau de la zone de contrôle

(C) est considérée comme un contrôle interne. Cette ligne

confirme que le volume d'échantillon était suffisant, que la

manipulation a été correctement effectuée et que la

membrane a été suffisamment imbibée.

Les Bonnes Pratiques de Laboratoire (BPL) recommandent

l'utilisation de matériel de contrôle afin de confirmer la

fiabilité du test.

12. Limites du test

•Le test NADAL® Troponin I est réservé au diagnostic in-vitro

professionnel. Le test est réservé à la détection qualitative

de la cTnl dans les échantillons de sang total, de sérum et

de plasma. Ce test livre un résultat qualitatif. Il ne permet

de calculer ni le taux de croissance ni la concentration en

cTnl.

•Le test NADAL® Troponin I détecte la présence de cTnI dans

les échantillons et ne devrait pas être le seul critère lors du

diagnostic de l'infarctus du myocarde.

•Si les résultats du test sont négatifs et que les symptômes

cliniques persistent, il est conseillé de réaliser de nouveaux

tests à l'aide de méthodes alternatives.

•Les échantillons de sang total, de sérum ou de plasma des

patients consommant de la biotine peuvent fournir des

résultats cliniques erronés (faux-négatifs). La biotine est

une substance présente dans les compléments alimentaires

(comprimés multivitaminés, comprimés de biotine,

compléments alimentaires pour la santé des cheveux, de la

peau et des ongles). Si les résultats du test ne

correspondent pas aux manifestations cliniques, la biotine

peut avoir créer une interférence avec le test.

•Un résultat négatif n'exclut aucunement la présence de cTnI

dans le sang. En effet, il est possible que la concentration

soit inférieure au seuil de détection (0,5 ng cTnI/mL). En

règle générale, la concentration en cTnI augmente

seulement quelques heures après l'apparition de la douleur.

Si le test est réalisé trop tôt, il est possible que la

concentration en cTnI soit trop faible pour être détectée par

le test. Si le myocarde n'a été endommagé que légèrement,

seules de faibles concentrations sont libérées. Un résultat

négatif n'exclut pas la possibilité d'un infarctus du

myocarde.

•En raison de la diversité du matériel étalon disponible dans

le commerce, la sensibilité du test peut varier légèrement

en fonction des normes. Les concentrations inférieures à

0,5 ng/ml ne sont pas détectées par le test.

• Un diagnostic clinique définitif ne devrait jamais s'appuyer

sur les résultats d'un seul test. Le diagnostic devrait être

établi par un médecin après évaluation de toutes les

données de laboratoire et cliniques.

•Les échantillons ayant des concentrations anormalement

élevées en anticorps hétérophiles ou en facteurs

rhumatoïdes (FR) peuvent affecter le résultat du test.

Même en cas de résultats positifs, un diagnostic définitif

devrait toujours être établi à partir des résultats d'examens

complémentaires.

•Dans les cas les plus rares, les auto-anticorps contenus dans

le corps des patients peuvent empêcher la réaction

antigènes-anticorps. En effet, les sites de réactions sont

bloqués. Ceci peut générer des faux-négatifs. Il est

important de rappeler que ce problème peut survenir de

manière générale sur toutes les méthodes de test avec

lesquels une protéine est détectée à partir d'une réaction

anticorps.

•Les échantillons de sang total présentant une forte viscosité

peuvent générer de faux résultats. Dans ce cas, répéter le

test avec un échantillon de sérum ou de plasma du même

patient testé avec une nouvelle cassette. De plus, les

échantillons de sang total qui ont été conservés plus de

deux jours peuvent générer des problèmes de migration.

13. Performance du test

Sensibilité analytique

Le seuil de détection de ce test est de 0,5 ng /mL de cTnl. Le

seuil de détection du test est régulièrement contrôlé à partir

du test „Human Cardiac Troponin I-T-C Complex“ de la société

Hytest disponible dans le commerce.

Sensibilité et spécificité diagnostiques

Une étude de corrélation a été menée à partir de 652

échantillons de plasma négatifs (confirmé par méthode EIA) et

253 échantillons de plasma positifs (confirmé par EIA). Les

résultats sont présentés dans le tableau suivant :

EIA

NADAL®

Troponin I

+

̶

Total

+

251

4

255

̶

2

648

650

Total

253

652

905

Sensibilité relative : 99,2% (97,2%-99,9%)*

Spécificité relative : 99,4% (98,4%-99,8%)*

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Performance générale : 99,3% (98,6%-99,8%)*

*95% Intervalle de confiance

Variabilité inter- et intra-lots

Les variations inter-sessions et intra-sessions des tests ont été

déterminées. Trois charges de test indépendantes ont été

testées à 10 reprises à des concentrations de cTnI de 0 ng/ml,

0,5 ng/ml, 2 ng/ml, 5 ng/ml et 10 ng/ml. Les échantillons ont

été correctement identifiés dans 99% de cas.

Réactions croisées

Des échantillons négatifs à la troponine I ont été testés avec

10.000 ng/ml de squelette de troponine I, 2.000 ng/ml

Troponine T et 20.000 ng/ml de tropomyosine cardiaque.

Aucune réaction croisée n'a été observée. Ceci démontre que

le test NADAL® Troponin I présente une haute spécificité pour

cTnI.

Les échantillons au fort taux en FR et en anticorps

hétérophiles peuvent générer des faux-négatifs. Parmi les 100

échantillons positifs à FR, 93% ont généré des résultats

négatifs. Parmi les 50 échantillons positifs à anticorps

hétérophiles, 96% ont généré des résultats négatifs corrects.

Substances interférentes

Les échantillons des patients ayant consommés des doses

importantes de biotine (compléments alimentaires) peuvent

générer des faux-négatifs.

À une concentration de 50 µg/mL (sauf indication contraire),

les substances et les médicaments suivants n'influencent pas

le développement des résultats positifs et négatifs corrects du

test NADAL® Troponin I :

Acétaminophène

Captopril Flunarizine

hydrochloride Oxazépam

Acide acétylsalicylique

Chloramphénicol

Furosémide

Pentoxifylline

Anisodamine

Chlordiazépoxide

Hydrochlorothiazide

Phénobarbital

Acide ascorbique Cilazapril Mononitrate

d'isosorbide Chinine

Aténolol Diclofénac Labétalol Ramipril

Atorvastatine

calcique Digoxine Tartrate de

métropropol D,L-Tyrosine

Cafféine Érythromycine Moricizine

hydrochloride

Triméthoprime

Bisoprololfumarat Félodipine Nifédipine Vérapamil

Albumine

humaine

(110 mg/mL)

Bilirubine

(6 mg/mL)

Hémoglobine

(10 mg/ml)

Cholestérol

(5 mg/mL)

Triglycéride

(15 mg/mL)

14. Bibliographie

1. Adams, et al. Biochemical markers of myocardial injury, Immunoassay Circulation

88: 750-763 (1993).

2. Mehegan JP, Tobacman LS, Cooperative interaction between troponin molecules

bound to the cardiac thin filament. J. Biol. Chem. 266:966 (1991)

3. Adams, et al. Diagnosis of Perioperative myocardial infarction with measurements

of cardiac troponin I. N.Eng.J. Med 330:670 (1994).

4. Hossein-Nia M, et al. Cardiac troponin / release in heart transplantation.

Ann.Thorac. Surg. 61 : 227 (1996).

5. Joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology: J.Am. Coll.

Cardio., 36(3), Myocardial Infarction Redefined, 2000.

Rev. 0, 2018-11-07 PF

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1. Uso previsto

El test NADAL® Troponin I es un inmunoensayo cromato-

gráfico de flujo lateral para la detección cualitativa de

troponina cardíaca I en muestras de sangre humana, suero o

plasma. El test proporciona un resultado preliminar como

ayuda en el diagnóstico de infarto de miocardio (IM). El test

NADAL® Troponin I ha sido diseñado solo para uso profesional.

El resultado preliminar obtenido con el test NADAL®

Troponin I no debe ser utilizado para un diagnóstico de

exclusión de IM.

2. Introducción y significado clínico

La troponina I cardíaca (CTnl) es una proteína que se

encuentra en el músculo cardíaco con un peso molecular de

22,5 kDa. La troponina I forma parte de un complejo de

troponinas que también incluye la troponina T y la troponina

C. Junto con la tropomiosina, este complejo de proteínas

forma el componente principal que regula la actividad de la

ATPasa de la actomiosina sensible al calcio en los músculos

estriados esqueléticos y cardiacos. Después de una lesión

cardíaca, la troponina I cardíaca se libera en la sangre 4-6

horas después de la aparición del dolor. El patrón de

liberación de cTnl es similar al CK-MB, pero mientras que el

nivel de CK-MB vuelve a la normalidad después de 72 horas, la

troponina I permanece elevada durante 6-10 días, lo que

proporciona una ventana de tiempo más larga para la

detección de lesiones cardíacas. La alta especificidad de las

mediciones de cTnl en la detección de lesiones miocárdicas ha

sido demostrada durante procedimientos quirúrgicos, después

de maratones o en casos de traumatismos torácicos

contundentes, entre otros. La liberación de cTnl también se ha

documentado en otras afecciones cardíacas además del

infarto agudo de miocardio (IAM), como la angina inestable, la

insuficiencia cardíaca congestiva y el daño isquémico causado

por la cirugía de derivación arterial coronaria. Debido a su alta

sensibilidad y especificidad para el tejido miocárdico, la

troponina I se ha convertido recientemente en uno de los

biomarcadores preferidos para el infarto de miocardio.

3. Principio del test

El test NADAL® Troponin I es un inmunoensayo cromato-

gráfico de flujo lateral para la detección cualitativa de

troponina I cardíaca en muestras de sangre humana completa,

suero o plasma.

Este test permite la detección de cTnl mediante la

interpretación visual del desarrollo del color en la tira de test

interna.

La detección de troponina I se produce con la ayuda de dos

anticuerpos específicos anti-cTnI, uno de los cuales está

codificado por colores y el otro media la unión a un reactivo

de captura inmovilizado en la zona de test. La mezcla se

desplaza a lo largo de la membrana por acción capilar. Si en la

muestra está presente una cantidad suficiente de cTnl, se

formará una línea coloreada en la región de la línea de test (T)

de la membrana. La presencia de esta línea coloreada indica

un resultado positivo, mientras que su ausencia indica un

resultado negativo. La formación de una línea coloreada en la

región de control (C) sirve como control del procedimiento,

indicando que el volumen de muestra añadido ha sido

adecuado y que la membrana se ha empapado

suficientemente.

4. Reactivos y materiales provistos

•5/10/20 casetes de test NADAL®

Troponin (incluye las

pipetas desechables)

•5/10/20 tubos capilares heparinizados

•1 búfer

•1 manual de instrucciones

5. Materiales adicionales

•Recipiente para la recolección de muestras

•Centrifugadora (solo para muestras de suero o plasma)

•Toallita con alcohol

•Lancetas (solo para muestras de sangre completa obtenidas

por punción digital)

•Perillas para tubos capilares (para muestras de sangre

completa obtenida por punción digital)

•Cronómetro

6. Almacenamiento y conservación

Los kits del test NADAL® Troponin I deben ser almacenados a

2-30°C y utilizados hasta la fecha de caducidad indicada en el

envase. Los casetes de test deben permanecer en su envase

sellado hasta su momento de uso. No congele los dispositivos.

No utilice los test después de la fecha de caducidad. Tenga

cuidado y proteja los componentes del kit de cualquier

contaminación. No utilice el test si hay evidencia de

contaminación microbiana o precipitación. La contaminación

biológica del dispositivo suministrado, recipientes o reactivos

puede producir resultados incorrectos.

7. Advertencias y precauciones

•Solo apto para el uso profesional de diagnóstico in-vitro.

•Lea atentamente todo el procedimiento antes de comenzar

el test.

•No utilice el test después de la fecha de caducidad indicada

en el envase.

•No utilice el dispositivo de test si el envase está dañado.

•No reutilice los test.

•No añada muestras en la zona de reacción (región de

resultados).

•Evite tocar la zona de reacción (región de resultados) para

evitar posibles contaminaciones.

•Evite la contaminación cruzada de las muestras utilizando

un nuevo recipiente de recolección para cada muestra

obtenida.

•No intercambie ni mezcle componentes de diferentes kits

de test.

•No coma, beba o fume en la zona donde manipule las

muestras y los kits de test.

•Mientras manipule las muestras utilice ropa protectora

como bata de laboratorio, guantes desechables y gafas de

protección.

•Manipule las muestras como si contuviesen agentes

infecciosos. Siga durante todo el procedimiento las

precauciones establecidas para riesgos microbiológicos, y

las directrices estándar para la correcta eliminación de las

muestras.

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•El kit de test contiene productos de origen animal. El

conocimiento certificado del origen y/o estado sanitario de

los animales no garantiza completamente la ausencia de

agentes patogénicos transmisibles. Por eso, se recomienda

tratar estos productos como potencialmente infecciosos y

seguir las medidas de seguridad habituales durante su

manipulación (p.ej. no ingerir ni inhalar).

•La humedad y la temperatura pueden afectar negativa-

mente a los resultados del test.

•La eliminación de los materiales utilizados debe realizarse

de acuerdo con las regulaciones locales.

8. Recolección de muestras y preparación

El test NADAL® Troponin I se puede realizar utilizando sangre

completa (de punción venosa o digital), suero o plasma.

Para recolectar muestras de sangre completa obtenidas por

punción digital:

•Lave la mano del paciente con jabón y agua caliente o

límpiela con una toallita con alcohol. Déjela secar.

•Realice un masaje en la mano, sin tocar el lugar de la

punción, frotándola en dirección a la punta del dedo medio

o anular.

•Pinche la piel con una lanceta estéril. Limpie la primera gota

de sangre.

•Frote suavemente desde la muñeca hasta la palma de la

mano, y después continúe hasta el dedo para producir una

gota redonda de sangre en la zona de punción.

Si la sangre completa se ha obtenido por punción digital se

debe realizar el test inmediatamente.

Muestras de sangre completa obtenidas por punción venosa

Los recipientes que contengan anticoagulantes, como EDTA,

citrato o heparina, deben utilizarse para la preparación de

muestras de sangre completa venosa o plasma.

Realice el test inmediatamente después de la recolección de la

muestra. No deje las muestras a temperatura ambiente

durante periodos de tiempo prolongados.

Si el test se va a realizar en los 2 días posteriores a la

recolección de la muestra, almacene a 2-8°C la sangre

completa obtenida por punción venosa.

No congele las muestras de sangre completa.

Muestras de suero y plasma

Separe el suero o plasma de la sangre lo antes posible para

evitar la hemólisis. Use solo muestras claras no hemolizadas.

Realice el test inmediatamente después de la recolección de la

muestra. No deje las muestras a temperatura ambiente

durante períodos de tiempo prolongados. Las muestras de

suero y plasma se pueden almacenar a 2-8°C hasta un máximo

de 3 días. Si desea almacenarlas durante más tiempo, debe

congelarlas por debajo de -20°C.

Lleve las muestras a temperatura ambiente antes de realizar

el test. Antes de realizar el test, las muestras congeladas

deben ser completamente descongeladas y mezcladas bien.

Evite los ciclos repetidos de congelado y descongelado de

muestras.

Si las muestras se van a transportar, se deben empaquetar de

acuerdo con las regulaciones aplicables para el transporte de

agentes etiológicos.

Las muestras ictéricas, lipémicas, hemolizadas, tratadas

térmicamente y contaminadas pueden dar lugar a resultados

inexactos en los test.

9. Procedimiento del test

Lleve los test, las muestras, el búfer y/o controles a

temperatura ambiente (15-30°C) antes de realizar el test.

1. Retire el casete de test de su envase de aluminio y utilícelo

lo antes posible. Los mejores resultados se obtendrán si el

test se realiza inmediatamente después de abrir el envase.

Etiquete el casete de test con la identificación del paciente

o de control.

2. Coloque el casete de test sobre una superficie limpia y

plana.

3. a) Para muestras de suero o plasma:

Sujetando una pipeta verticalmente, añada

2 gotas (aprox. 50 μL) de una muestra de

suero/plasma al pocillo (S) del casete de

test.

b) Para muestras de sangre completa

obtenidas por punción venosa:

Sujetando una pipeta verticalmente, añada

3 gotas (aprox. 75 μL) de una muestra de

sangre completa al pocillo (S) del casete de

test y después añada 1 gota de búfer al

pocillo (S).

c) Para muestras de sangre completa

obtenidas por punción digital:

I. Para usar un tubo capilar:

Coloque el extremo del tubo capilar sobre la

sangre hasta llenarlo completamente

(aprox. 100 µL). Evite la formación de

burbujas de aire. Distribuya toda la muestra

de sangre completa en el pocillo (S) del

casete de test, y luego añada 1 gota de

búfer al pocillo (S).

II. Para utilizar gotas colgantes:

Coloque el dedo del paciente de forma que

la gota de sangre caiga exactamente sobre

el pocillo para la muestra (S) del casete de

test. Deje caer 3 gotas de sangre completa

obtenida por punción digital en el centro del

pocillo para la muestra (S) del casete de

test, luego añada 1 gota de búfer al pocillo

(S).

4. Active el cronómetro.

5. Espere a que aparezca(n) la(s) línea(s)

coloreada(s). Lea los resultados del test

después de 10 minutos. Confirme los

resultados negativos del test después de 20

minutos exactamente. No interprete los

resultados después de más de 20 minutos.

10. Interpretación del resultado

Positivo

Aparecen dos líneas coloreadas en la zona

de resultados. Aparece una línea en la

región de control (C) y la otra en la región

de test (T).

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Nota:

La intensidad de color en la región de la línea de test (T) puede

variar en función de la concentración del analito presente en

la muestra. Por lo tanto, cualquier tono de color en la región

de test debe considerarse positivo, incluso si es débil.

Recuerde que este test solo es cualitativo y no puede

determinar la concentración del analito presente en la

muestra.

Negativo

Solo aparece una línea coloreada en la

región de control (C). No aparece ninguna

línea coloreada en la región de la línea de

test (T). Confirme los resultados negativos

después de 20 minutos exactamente.

No válido

No aparece la línea de control (C). Si no

aparece la línea de control dentro del

tiempo de lectura especificado, los

resultados del test no son válidos y se

deben descartar. Si esto sucede, revise el

procedimiento y repita el test con un nuevo

casete. Si el problema persiste, deje de usar

el kit inmediatamente y contacte con su

distribuidor.

Nota: las razones más probables de que la línea de control no

aparezca son: insuficiente volumen o alta viscosidad de la

muestra, test caducados o procedimiento operativo

incorrecto.

11. Control de calidad

El casete contiene un control interno del procedimiento:

La línea coloreada que aparece en la región de control (C) se

considera un control interno del procedimiento. Esto confirma

que el volumen de la muestra ha sido adecuado, que la

membrana se ha empapado suficientemente y que la técnica

del procedimiento ha sido correcta.

Las Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL) recomiendan el uso

de materiales de control externos para asegurar que el

funcionamiento del test es correcto.

12. Limitaciones

•El test NADAL® Troponin I solo es apto para el uso

profesional de diagnóstico in-vitro. Este test debe utilizarse

únicamente para la detección cualitativa de cTnl en

muestras de sangre completa, suero o plasma. Se trata de

un test cualitativo, por lo que no detecta ni la cantidad ni el

aumento de la concentración de cTnl.

•El test NADAL® Troponin I solo indica la presencia de cTnl en

la muestra y no se debe tomar como único criterio para el

diagnóstico de infarto de miocardio.

•Si el test muestra un resultado negativo y los síntomas

clínicos persisten, se deben realizar siempre test adicionales

utilizando otros métodos clínicos.

•Las muestras de sangre completa, suero o plasma de

pacientes que han ingerido altos niveles de biotina en

suplementos dietéticos (multivitaminas, suplementos de

biotina en sí mismos u otros suplementos para el

crecimiento del cabello, la piel y las uñas) pueden causar

resultados de test clínicamente significativos e inexactos

(falsos negativos). Si el resultado del test no coincide con el

aspecto clínico de un paciente, la interferencia de la biotina

puede considerarse como una posible fuente de error.

•Un resultado negativo no excluye, en ningún caso, la

presencia de cTnI en sangre, ya que su concentración puede

estar por debajo del límite de detección del test

(0,5 ng cTnI/mL). Téngase en cuenta que la concentración de

cTnI normalmente aumenta unas pocas horas después de la

aparición del dolor. Si se realiza el test demasiado pronto, la

concentración de cTnI podría ser demasiado baja para ser

determinada de manera fiable por el test. En caso de daño

leve en el músculo cardíaco, solo se pueden liberar bajas

concentraciones de cTnI. Por esta razón, un resultado

negativo no excluye, en ningún caso, la posibilidad de un

infarto de miocardio.

•Debido a la heterogeneidad de los materiales estándar

comercialmente disponibles, la sensibilidad del test puede

variar con los diferentes estándares/métodos de medición.

Las concentraciones inferiores a 0,5 ng/mL ya no son

detectadas de forma fiable por el test.

•Como en todos los test de diagnóstico, el diagnóstico clínico

definitivo solo debe ser realizado por un médico después de

la evaluación de todos los datos clínicos y de laboratorio.

• Títulos inusualmente altos de anticuerpos heterófilos o

factores reumatoides (FR) pueden afectar a los resultados.

Por lo tanto, incluso si los resultados de los test son

positivos, los resultados de otros exámenes clínicos deben

ser siempre utilizados para hacer un diagnóstico.

•En casos poco frecuentes, los autoanticuerpos en la sangre

del paciente previenen una reacción antígeno-anticuerpo

en el test mediante el bloqueo de los puntos de unión. Esto

puede producir resultados falsos negativos. Cabe señalar

que estos problemas pueden presentarse generalmente en

todos los métodos de test en los que la detección de

proteínas se produce a través de una reacción de

anticuerpos.

•Las muestras de sangre completa con una viscosidad muy

alta pueden conducir a resultados de test no válidos.

Usando un nuevo casete, repita el test con una muestra de

suero o plasma del mismo paciente. Las muestras de sangre

completa que han sido almacenadas durante más de 2 días

también pueden causar problemas de migración.

13. Características del rendimiento

Sensibilidad analítica

El límite de detección del test es de 0,5 ng cTnI/mL de la

muestra.

El límite de detección se comprueba regularmente en el

procedimiento de control de calidad con el "Human Cardiac

Troponin I-T-C Complex" de la empresa HyTest, disponible

comercialmente.

Sensibilidad y especificidad de diagnóstico

Se realizó un estudio de correlación en 652 muestras de

plasma negativo (EIA confirmado) y 253 muestras de plasma

positivo (EIA confirmado). Los resultados se presentan en la

siguiente tabla:

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EIA

Test

NADAL®

Troponin I

+

̶

Total

+

251

4

255

̶

2

648

650

Total

253

652

905

Sensibilidad relativa: 99,2% (97,2%-99,9%)*

Especificidad relativa: 99,4% (98,4%-99,8%)*

Concordancia general: 99,3% (98,6%-99,8%)*

*95% de intervalo de confianza

Variabilidad interlote e intralote

La variabilidad interlote e intralote del test se determinó

analizando 3 lotes de test independientes con concen-

traciones de cTnI de 0 ng/mL, 0,5 ng/mL, 2 ng/mL, 5 ng/mL y

10 ng/mL en una determinación de 10 veces. Las muestras

fueron identificadas correctamente en más del 99% de los

casos.

Reacciones cruzadas

Se analizaron muestras negativas de troponina I con

10.000 ng/mL de troponina esquelética I, 2.000 ng/mL de

troponina T y 20.000 ng/mL de tropomiosina cardíaca. No se

observaron reacciones cruzadas. Esto demuestra que el test

NADAL® Troponin I es altamente específico para cTnI.

Las muestras con altas concentraciones de RF o de

anticuerpos heterófilos pueden dar resultados falsos positivos.

El 93% de los resultados negativos correctos se obtuvieron con

100 muestras positivas de RF. El 96% de los resultados

negativos correctos se obtuvieron con 50 muestras positivas

de anticuerpos heterófilos.

Sustancias interferentes

Las muestras de pacientes que han ingerido altos niveles de

biotina en suplementos dietéticos pueden presentar resulta-

dos negativos falsos.

Las drogas y sustancias enumeradas a continuación no afectan

a la generación de resultados positivos o negativos correctos

obtenidos con el test NADAL® Troponin I a la concentración de

50 μg/mL (a menos que se indique lo contrario).

Acetaminofeno

Captopril Clorhidrato de

flunarizina Oxazepam

Ácido acetilsalicílico

Cloranfenicol

Furosemida Pentoxif il ina

Anisodamina

Clordiazepóxido

Hidroclorotiazida

Fenobarbital

Ácido

ascórbico Cilazapril Mononitrato de

isosorbida Quinina

Atenolol Diclofenaco Labetalol Ramipril

Atorvastatina

cálcica Digoxina Tartrato de

metoprolol D,L Tirosina

C a f e í n a Eritromicina Clorhidrato de

moracizina Trimetoprima

Bisoprolol Fumarato

Felodipina Nifedipina Verapamilo

Albúmina humana

(110 mg/mL)

Bilirubina

(6 mg/mL)

Hemoglobina

(10 mg/mL)

Colesterol

(5 mg/mL)

Triglicéridos

(15 mg/mL)

14. Referencias

1. Adams, et al. Biochemical markers of myocardial injury, Immunoassay Circulation

88: 750-763 (1993).

2. Mehegan JP, Tobacman LS, Cooperative interaction between troponin molecules

bound to the cardiac thin filament. J. Biol. Chem. 266:966 (1991)

3. Adams, et al. Diagnosis of Perioperative myocardial infarction with measurements

of cardiac troponin I. N.Eng.J. Med 330:670 (1994).

4. Hossein-Nia M, et al. Cardiac troponin / release in heart transplantation.

Ann.Thorac. Surg. 61 : 227 (1996).

5. Joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology: J.Am. Coll.

Cardio., 36(3), Myocardial Infarction Redefined, 2000.

Rev. 0, 2018-11-07 GP

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1. Scopo del test

Il test NADAL® Troponin I è un immunodosaggio cromato-

grafico a flusso laterale per l'individuazione qualitativa della

troponina I cardiaca in campioni di sangue intero, siero oppure

plasma. Il test fornisce un risultato preliminare come supporto

nella diagnosi di infarto del miocardio (MI). Il test NADAL®

Troponin I è concepito solo per uso professionale.

Il risultato preliminare ottenuto con il test NADAL® Troponin I

non va utilizzato come criterio unico per l'esclusione di una

diagnosi di infarto del miocardio (MI).

2. Introduzione e Significato Clinico

La troponina I cardiaca (cTnI) è una proteina che si trova

normalmente nel muscolo cardiaco con un peso molecolare di

22.5 kDa. La troponina I è parte di un complesso che include

anche troponina T e troponina C. Insieme alla tropomiosina,

questo complesso di proteine forma il componente principale

che regola l'attivitá calcio ATPasi sensibile dell'actomiosina nel

muscolo scheletrico striato e nel muscolo cardiaco. In seguito

ad un danno cardiaco, la troponina I cardiaca viene rilasciata

nel sangue 4-6 ore dopo la comparsa del dolore. La modalitá

di rilascio della cTnl é simile a quella della CK-MB, ma mentre il

livello della CK-MB torna normale dopo 72 ore, quello della

troponina I rimane elevato per 6-10 giorni fornendo pertanto,

un lasso di tempo maggiore per la rilevazione del danno

cardiaco. L'elevata specificità delle misurazioni di cTnl

nell'individuazione del danno miocardico è stata dimostrata

durante le procedure operatorie, dopo una maratona oppure

in caso di trauma toracico brusco. Il rilascio di cTnl è stato

anche documentato anche in situazioni diverse da infarto

miocardico acuto (AMI) quali ad esempio angina instabile,

insufficienza cardiaca e danno ischemico causati da operazioni

delle arterie coronarie con bypass. A causa della sua elevata

sensibilità e specificità per il tessuto miocardico, la troponina I

è diventata recentemente uno dei principali biomarker per

l'infarto del miocardio.

3. Principio del Test

Il test NADAL® Troponin I è un immunodosaggio cromato-

grafico a flusso laterale per l'individuazione qualitativa di

troponina I in campioni di sangue intero, siero oppure plasma.

Questo test permette l'individuazione della cTnl attraverso

l'interpretazione visiva dello sviluppo di colore sulla striscia

interna del test.

L'individuazione di troponina I avviene con l'aiuto di due

anticorpi specifici anti-cTnI, di cui uno è codificato colore e

l'altro media il legame per catturare il reagente immobilizzato

sull'area del test. Il composto migra lungo la membrana per

azione capillare. Se nel campione è presente una quantità

sufficiente di cTnl, si forma una linea colorata nella regione

della linea del test (T) della membrana. La presenza di questa

linea colorata nella regione del test indica un risultato positivo

mentre la sua assenza è indice di un risultato negativo. La

presenza di una linea colorata nella regione della linea di

controllo (C) funge da controllo procedurale interno indicando

che è stato utilizzato il corretto volume di campione e che la

migrazione sulla membrana è avvenuta correttamente.

4. Reagenti e Matreriali Forniti

•5/10/20 test a cassetta NADAL® Troponin I (pipette

monouso incluse)

•5/10/20 tubi capillari eparinizzati

•1 soluzione

•1 istruzioni per l'uso

5. Altri materiali richiesti

•Contenitore per la raccolta del campione

•Centrifuga (solo per i campioni di siero oppure plasma)

•Tampone alcol

•Bisturi (solo per i campionidi sangue intero)

•Pompette per i tubi capillari (solo per il campione di sangue

intero prelevato tramite puntura del polpastrello)

•Timer

6. Conservazione e Stabilità

I kit di test NADAL® Troponin I vanno conservati a 2-30°C ed

utilizzati fino alla data di scadenza riportata sulla confezione. I

test a cassetta vanno conservati nella loro confezione fino al

loro utilizzo. Non congelare i test. Non utilizzare i test oltre la

data di scadenza. Prevenire episodi di contaminazione dei kit

di test. Non utilizzare in caso di evidente contaminazione

microbica o deterioramento. Contaminazione biologica di

apparecchiature, contenitori o reagenti può portare

all`ottenimento di falsi risultati.

7. Avvertenze e Precauzioni

•Esclusivamente per uso diagnostico professionale in-vitro.

•Leggere attentamente la procedura del test prima di

eseguirlo.

•Non utilizzare il test oltre la data di scadenza riportata sulla

confezione.

•Non utilizzare il test se la confezione dovesse risultare

danneggiata.

•Non riutilizzare i test.

•Non aggiungere i campioni all’area di risultato (result area).

•Al fine di evitare la contaminazione non toccare l'area di

risultato (result area).

•Evitare la contaminazione incrociata dei campioni

utilizzando sempre un nuovo contenitore per la raccolta del

campione.

•Non sostituire o mescolare i componenti provenienti da kit

differenti.

•Non mangiare, bere o fumare nei luoghi in cui vengono

trattati i campioni ed i test.

•Indossare abiti protettivi quali camici da laboratorio, guanti

monouso ed occhiali protettivi quando vengono trattati i

campioni.

•Considerare tutti i campioni come potenzialmente infettivi.

Osservare le normali precauzioni contro rischi

microbiologici e seguire le procedure standard per il

corretto smaltimento dei campioni.

•Il kit fornito contiene prodotti di origine animale. La

conoscenza certificata della provenienza e/o condizione

sanitaria degli animali non esclude del tutto l'assenza di

agenti patogeni trasmissibili. Si raccomanda, pertanto, che

questi prodotti vengano trattati come potenzialmente

infettivi ed utilizzati nel rispetto delle normali pratiche di

sicurezza (ad esempio, non ingerire o inalare).

ITALIANO Test NADAL® Troponin I (Ref. 282041N-05/282041N-10/282041N-20)

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•Umiditá o temperature elevate possono influenzare in

maniera negativa i risultati del test.

•I materiali utilizzati nello svolgimento del test vanno smaltiti

nel rispetto delle regolamentazioni locali.

8. Preparazione e Raccolta del Campione

Il test NADAL® Troponin I può essere eseguito su campioni di

sangue intero (ottenuti tramite prelievo venoso o puntura del

polpastrello), siero o plasma.

Campione di sangue intero tramite puntura del polpastrello:

•Lavare la mano del paziente con sapone ed acqua calda o

pulire con alcol la zona da incidere. Fare asciugare.

•Massaggiare la mano del paziente senza toccare la zona del

prelievo sfregando la mano verso il basso in direzione del

dito medio o dell’anulare.

•Incidere la punta del dito utilizzando un bisturi sterile.

Asciugare la prima goccia di sangue.

•Sfregare leggermente la mano del paziente dal polso al

palmo fino al dito inciso affinchè si formi una nuova goccia

di sangue.

I campioni raccolti attreverso puntura del polpastrello

andrebbero testati immediatamente.

Campione di sangue intero tramite prelievo venoso

Utilizzare contenitori con anticoagulanti quali EDTA, citrato

oppure eparina per la preparazione dei campioni di sangue

intero venoso oppure plasma.

Eseguire il test immediatamente dopo la raccolta del

campione. Non lasciare i campioni a temperatura ambiente

per lunghi periodi di tempo.

Se il test viene eseguito entro 2 giorni dalla raccolta del

campione, il sangue intero raccolto tramite prelievo venoso va

conservato a 2-8°C.

Non congelare i campioni di sangue intero.

Campione di siero e plasma

Separare siero e plasma immediatamente al fine di evitare

emolisi. Utilizzare solo campioni chiari non emolizzati.

Eseguire il test immediatamente dopo la raccolta del

campione. Non lasciare i campioni a temperatura ambiente

per lunghi periodi di tempo. Campioni di siero e plasma

possono essere conservati tra 2-8°C per un massimo di 3

giorni. Per conservazioni prolungate, i campioni vanno

conservati a -20°C.

Portare i campioni a temperatura ambiente prima di eseguire

il test. I campioni congelati vanno fatti scongelare completa-

mente e mescolati adeguatamente prima di eseguire il test.

Evitare episodi ripetuti di congelamento e scongelamento dei

campioni.

Nel caso in cui si intenda spedire i campioni, questi

andrebbero imballati seguendo le regolamentazioni locali in

materia di trasporto di agenti eziologici.

I campioni itterici, lipemici, emolizzati, trattati termicamente e

contaminati possono portare a risultati imprecisi del test.

9. Procedura del Test

Portare i test, i campioni, le soluzioni e/o i controlli a

temperatura ambiente (15-30°) prima di eseguire il test.

1. Nel caso in cui si intenda spedire i campioni, questi

andrebbero imballati seguendo le regolamentazioni locali

in materia di trasporto di agenti eziologici. Si otterranno i

risultati migliori se il test viene eseguito immediatamente

dopo l'apertura della confezione. Etichettare il test a

cassetta con l'identificativo del paziente o controllo.

2. Posizionare il test a cassetta su una superficie piana e

pulita.

3. a) Per i campioni di siero o plasma:

Mantenendo la pipetta verticalmente,

aggiungere 2 gocce (circa 50 μL) di

campione di siero oppure plasma al

pozzetto di raccolta del campione (S) del

test a cassetta.

b) Per campioni di sangue intero raccolto

tramite prelievo venoso:

Mantenendo la pipetta verticalmente,

aggiungere 3 gocce (circa 75 μL) di

campione di sangue intero al pozzetto di

raccolta del campione (S) del test a

cassetta, versare poi 1 goccia di soluzione

nel pozzetto di raccolta del campione (S).

c) Per campioni di sangue intero prelevato

tramite puntura del polpastrello:

I. Utilizzare il tubo capillare:

Applicare il tubo capillare sul sangue finchè

sarà riempito completamente (circa

100 μL). Evitare la formazione di bolle

d'aria. Aggiungere tutto il campione di

sangue intero nel pozzetto di raccolta del

campione (S) del test a cassetta, versare poi

1 goccia di soluzione nel pozzetto di

raccolta del campione (S).

II. Trasferire direttamente le gocce di

sangue:

Posizionare il dito del paziente al di sopra

dell'area di raccolta del campione del test a

cassetta in modo che la goccia di sangue

cada direttamente in corrispondenza del

pozzetto di raccolta (S). Far scendere

3 gocce di sangue intero direttamente al

centro del pozzetto di raccolta del campione

(S) del test a cassetta, versare poi 1 goccia

di soluzione nel pozzetto di raccolta del

campione (S).

4. Avviare il timer.

5. Attendere la comparsa delle linee colorate.

Leggere il risultato del test entro 10 minuti.

Confermare i risultati dopo 20 minuti. Non

interpretare i risultati dopo più di 20 minuti.

10. Interpretazione dei risultati

Positivo

Compaiono due linee nella finestra di

risultato. Una linea colorata nella regione

della linea di controllo (C) e una linea nella

regione della linea del test (T).

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Nota bene:

L'intensità della linea del test nella regione della linea del test

(T) varia in base alla concentrazione dell'analita presente nel

campione. Pertanto, qualsiasi sfumatura di colore nella

regione della linea del test andrebbe considerata come

indicativa di risultato positivo. Questo test qualitativo non è in

grado di determinare la concentrazione dell’analita nel

campione.

Negativo

Si sviluppa solo una linea colorata nella

regione della linea di controllo (C). Non

compare alcuna linea nella regione della

linea del test (T). Confermare i risultati

negativi dopo esattamente 20 minuti.

Non valido

La linea di controllo (C) non compare. I

risultati di qualsiasi test che non abbia

prodotto alcuna linea di controllo entro i

tempi di lettura indicati, non vanno presi in

considerazione. In tal caso si consiglia di

rivedere la procedura e ripetere il test

utilizzando un nuovo test a cassetta. Se il

problema persiste, si consiglia di

interrompere immediatamente l'utilizzo

dello stesso lotto di test e contattare il

proprio distributore.

Nota bene: Un volume insufficiente di campione, elevata

viscosità del campione, test scaduti oppure procedure

operative scorrette sono tra le principali cause per la mancata

comparsa della linea di controllo.

11. Controllo Qualità

Un controllo procedurale interno è inserito nel test a cassetta:

La linea colorata che compare in corrispondenza della regione

della linea di controllo (C) è da considerarsi un controllo

procedurale interno. Ciò conferma che è stato aggiunto il

giusto volume di campione, che la migrazione lungo la

membrana è avvenuta correttamente e che sono state

applicate le corrette tecniche procedurali.

La Buona Pratica di Laboratorio (GLP) raccomanda l'impiego di

metodi di controllo al fine di confermare la corretta

performance del kit di test.

12. Limiti del Test

•Il test NADAL® Troponin I è un test per uso diagnostico

professionale in-vitro. Questo test dovrebbe essere

utilizzato per l'individuazione qualitativa di cTnl in campioni

di sangue intero, siero oppure plasma. In ogni caso, nè il

valore quantitativo nè il grado di aumento della

concentrazione di cTnl possono essere determinati con

questo test qualitativo.

•Il test NADAL® Troponin I indica solo la presenza di cTnl nel

campione e non andrebbe utilizzato come unico criterio per

la diagnosi di infarto miocardico.

•Se il risultato del test è negativo ma i sintomi clinici

persistono, si consiglia di eseguire altri test utilizzando altri

metodi clinici di analisi.

•Campioni di sangue intero, siero o plasma di pazienti che

hanno ingerito livelli elevati di biotina in integratori

alimentari (multivitamine, integratori di biotina o altri

integratori per la crescita di capelli, pelle e unghie) possono

causare risultati di test clinicamente significativi e imprecisi

(falsi negativi). Se il risultato del test non corrisponde alla

presentazione clinica di un paziente, l'interferenza della

biotina può essere considerata una possibile fonte di errore.

•Un risultato negativo non esclude in alcun caso la presenza

di cTnl nel sangue in quanto la sua concentrazione potrebbe

essere al di sotto del limite di rilevazione del test

(0,5 ng cTnI/mL). Da notare che la concentrazione di cTnl in

genere aumenta poche ore dopo la comparsa del dolore. Se

testato troppo presto, la concentrazione di cTnl nel

campione potrebbe essere troppo bassa per essere

determinata in modo affidabile con il test. In caso di danno

superficiale del muscolo cardiaco, vengono rilasciate solo

basse concentrazioni di cTnl. Pertanto, un risultato

negativo non preclude in alcun modo la possibilità di

infarto miocardico.

•A causa dell'eterogeneità dei materiali standard disponibili

in commercio, la sensibilità del test può variare con metodi

di misurazione/standard. Concentrazioni al di sotto di

0,5 ng/ml non sono rilevate in maniera affidabile con

questo test.

•Come per tutti i test diagnostici, la diagnosi clinica finale

dovrebbe essere fatta solo dal medico in seguito alla

valutazione di tutti gli esami clinici e di laboratorio.

• Generalmente titoli alti di anticorpi eterofili o fattore

reumatoide (FR) possono influire sui risultati. Pertanto,

anche se i risultati del test sono positivi, i risultati di altri

esami clinici dovrebbero essere sempre utilizzati per fare la

diagnosi finale.

•Raramente, gli autoanticorpi nel sangue del paziente

prevengono la reazione antigene-anticorpo nel test

bloccando i siti di legame. Questo può portare a falsi

risultati negativi. Da notare che queste problematiche

possono verificarsi in genere con tutti i metodi di test in cui

l'individuazione della proteina avviene attraverso la

reazione anticorpo.

•Il campione di sangue intero con un'elevata viscosità può

portare a risultati del test non validi. Ripetere il test

utilizzando un nuovo test a cassetta con un campionedi

siero oppure plasma. I campioni di sangue intero conservati

per più di 2 giorni possono causare problemi di migrazione.

13. Caratteristiche Tecniche

Sensibilità analitica

Il limite di rilevazione del test è 0,5 ng cTnI/mL campione.

Il limite di rilevazione è controllato regolarmente durante la

procedura di controllo qualità con un test normalmente

reperibile in commercio "Human Cardiac Troponin I-T-C

Complex" della ditta HyTest.

Sensibilità e Specificità diagnostica:

È stato condotto uno studio di correlazione con 652 campioni

negativi di plasma (confermati EIA) e 253 campioni positivi di

plasma (confermati EIA). I risultati sono riassunti nella

seguente tabella:

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